介紹

大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)Elisa試劑盒用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿中的內(nèi)源性促甲狀腺素釋放激素（TRH）濃度。

大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)Elisa試劑盒

檢測(cè)原理

大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)Elisa試劑盒采用競(jìng)爭抑制酶免疫法，試劑盒中的 96 孔酶標(biāo)板已預(yù)包被羊抗兔抗體（固相二抗）；向?qū)?yīng)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品 / 樣本、TRH 特異性抗體及辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的 TRH，HRP 標(biāo)記 TRH 與樣本中未標(biāo)記 TRH 競(jìng)爭結(jié)合特異性抗體，形成包被二抗 - 抗 TRH 抗體 - TRH（或 HRP-TRH）復(fù)合物；加入底物溶液后，顯色強(qiáng)度與樣本中 TRH 含量呈負(fù)相關(guān)，終止反應(yīng)后測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線即可反算 TRH 濃度。

檢測(cè)流程

大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)Elisa試劑盒使用時(shí)，所有試劑（含標(biāo)準(zhǔn)品、樣本）室溫（18-25℃）平衡至少 30 分鐘，試劑管開啟前建議離心數(shù)分鐘，使管壁液體集中至管底。若 20 倍濃縮液有結(jié)晶，室溫溶解后，取 15 mL 濃縮液加去離子水至 300 mL，臨用前配制（用刻度容器混勻）。接著，確定所需孔數(shù)，大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)Elisa試劑盒中剩余孔與干燥劑密封后 4℃保存；設(shè) 1 個(gè)空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品及樣本均做復(fù)孔。每孔加 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，隨后每孔加 50 μl HRP 偶聯(lián)物，空白孔不加，再加 50 μl TRH抗體，輕柔混勻，封板后 37℃孵育 1 小時(shí)。吸棄孔內(nèi)液體，每孔加 200 μl 1× 洗滌緩沖液，靜置 10 秒后棄液，重復(fù) 3 次；最后倒置酶標(biāo)板，在吸水紙上拍干。每孔加 50 μl 底物 A 和 50 μl 底物 B，混勻后 37℃避光孵育 15 分鐘，可每隔 10 分鐘觀察顯色，若顏色過深可提前加終止液。每孔加 50 μl 終止液，輕柔混勻，10 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè) 450 nm 吸光度[1]。

參考文獻(xiàn)

[1]Wang J, Liu S, Xie Y, Xu C. Association analysis of gut microbiota-metabolites-neuroendocrine changes in male rats acute exposure to simulated altitude of 5500 m[J]. Scientific Reports, 2023, 13: 9225.