青風(fēng)藤為防己科植物青藤和毛青藤的干燥藤莖，又名青藤、尋風(fēng)藤、滇防己等，被收錄至ChP 2020年版一部。青風(fēng)藤味苦、辛，性平，是治療風(fēng)濕痹癥、關(guān)節(jié)腫脹的傳統(tǒng)中藥，常用于風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。青風(fēng)藤中含有豐富的生物堿，例如青藤堿(sinomenine)、四氫表小檗堿、雙青藤堿、木蘭花堿等，其中青藤堿是主要成分，含量達(dá)2%，具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制、抗腫瘤等作用。鹽酸青藤堿的水溶性高于青藤堿，有利于藥物吸收，因此主要以鹽酸青藤堿的形式藥用。
目前鹽酸青藤堿的工業(yè)提取方法主要包括溶劑直接回流法、堿化回流法與酸水提取法三大類。酸水提取法是以鹽酸為溶劑，通過浸漬或滲漉獲得酸水提取液，后續(xù)步驟包括鈣鹽沉淀、調(diào)低pH值后氯仿萃取、再次調(diào)節(jié)pH值至酸性、濃縮結(jié)晶、重結(jié)晶、干燥。與回流法相比，酸水提取法無需加熱、能耗更低、氯仿用量更小，鹽酸青藤堿的提取率及純度較高，成本適中，但工藝步驟較多，鈣鹽的使用也會(huì)產(chǎn)生大量固體廢渣，有必要進(jìn)一步優(yōu)化該工藝過程。
針對(duì)酸水提取法目前存在的問題，本文設(shè)計(jì)了“萃取 -水洗 - 反萃取”的鹽酸青藤堿提取和純化新工藝，用于代替現(xiàn)有的鈣鹽沉淀過程。
提取方法[1]
1、青風(fēng)藤酸水提取液的制備
稱取青風(fēng)藤藥材800g，加入0.3mol/L鹽酸8L浸提，使用電動(dòng)攪拌器攪拌5h以上，過濾，得青風(fēng)藤酸水提取液。
2、鹽酸青藤堿的提取新工藝設(shè)計(jì)
本研究通過“萃取-水洗-反萃取”工藝代替目前已有的“鈣鹽沉淀- 萃取 -酸化”工藝。氯仿作為萃取用有機(jī)溶劑，在經(jīng)過第4步反萃取、分相后便不再參與鹽酸青藤堿的制備。如果氯仿可在生產(chǎn)過程中重復(fù)使用，便可減少生產(chǎn)成本，因此探究氯仿能否多次套用便顯得尤為重要。反萃取后的氯仿若能夠成功套用至下一次的提取過程，便可通過循環(huán)利用減少有機(jī)溶劑用量、降低生產(chǎn)成本。改進(jìn)后的鹽酸青藤堿精制新工藝具體流程圖如圖所示。
3、萃取和反萃取試驗(yàn)操作
量取青風(fēng)藤酸水提取液60mL，加至1000mL藍(lán)蓋瓶中，用5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)青風(fēng)藤酸水提取液的pH值至9~10，得到堿性體系(E);照一定的體積比將氯仿加至E中，攪拌條件下萃取1h以上。將平衡后的萃取體系移至離心管中，離心(3577xg)10min后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中分相，下相為有機(jī)相(O)，棄去水相。將O相與純凈水照一定的體積比加至分液漏斗中，然后充分振蕩、水洗，靜置分相后棄去上層水相，得到有機(jī)相(O)。使用0.01mol/L鹽酸對(duì)O相進(jìn)行反萃取:將二者照一定的體積比混合，然后置磁力攪拌機(jī)上攪拌、萃取30min以上,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置分相，得到水相(A，即鹽酸青藤堿反萃取液)及有機(jī)相(O3,即用于回收套用的氯仿)。
在萃取、分相的過程中，水相的顏色明顯較氯仿相深，表明大部分色素留在水相中被棄去;洗滌過程中色素更多地留在氯仿層;但在反萃取過程中則是水相顏色略深。這可能是pH值變化帶來的影響。結(jié)晶得到的鹽酸青藤堿終產(chǎn)品為白色晶體。
分析方法
1、溶液配制
對(duì)照品溶液:稱取青藤堿對(duì)照品9.85mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為985ug/mL的對(duì)照品溶液母液，充分混勻后，精密量取母液并適量加甲醇稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為985、492.5、98.5ug/mL的對(duì)照品溶液;各濃度對(duì)照品溶液經(jīng)0.22um有機(jī)相微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液，即得。
供試品溶液:稱取制備的鹽酸青藤堿晶體8mg,置10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分混勻后經(jīng)0.22um有機(jī)相微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
2、色譜條件
色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6mmx250mm,5um):流動(dòng)相甲醇、水和乙二胺(體積比50:50:0.25%)，等度洗脫:檢測(cè)波長262nm;流速1.0mL/min;柱溫25℃:進(jìn)樣量10uL。本色譜條件下，鹽酸青藤堿的HPLC譜圖如圖所示[1]。
參考文獻(xiàn)
[1]彭祖仁,任丹丹,頡佳樂,等. 鹽酸青藤堿萃取和精制的新工藝[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2024,55(10):1399-1405. DOI:10.16522/j.cnki.cjph.2024.10.012.