刀豆蛋白是一種從刀豆種子中提取的糖類結(jié)合蛋白，具有多種生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域?；瘜W(xué)性質(zhì)：四聚體球蛋白，分子量約102,000，由四個(gè)亞基組成，每個(gè)亞基含237個(gè)氨基酸殘基，結(jié)合一個(gè)Ca2?和一個(gè)Mn2?，含一個(gè)糖結(jié)合位點(diǎn)。?作用機(jī)制：專一性識(shí)別α-甘露糖或α-葡萄糖，與糖鏈結(jié)合后激活免疫細(xì)胞或誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)。主要用于糖蛋白分離、免疫組化分析及細(xì)胞信號(hào)通路研究 。也可作為抗癌藥物研究對(duì)象，但目前未被批準(zhǔn)為治療藥物 。
合成方法
1 用0.1M磷酸鹽緩沖液（pH 6.5）洗滌PEG-AA微粒。進(jìn)行羧基活化反應(yīng)：在pH 6.5的磷酸鹽緩沖液中加入0.1M EDC（2.5 mL）和0.1M NHS（2.5 mL）。室溫孵育4小時(shí)后移除微粒。用pH 6.5磷酸鹽緩沖液洗去過(guò)量偶聯(lián)劑。加入5 mL pH 6.5磷酸鹽緩沖液（0.2 mg/mL濃度）反應(yīng)12小時(shí)。先用pH 7.4 PBST緩沖液離心微粒，再用凝集素結(jié)合緩沖液離心。先用pH 7.4 PBST緩沖液洗滌，再用凝集素結(jié)合緩沖液洗滌，得產(chǎn)物刀豆蛋白。[1]
2 將0.5%（重量）PEG-二丙烯酰胺（Mn=8000 Da）（50 mg）分散于1 M硫酸鈉溶液（10 mL）中。向分散液中加入濃度為0.01%（重量）的紫外光引發(fā)劑Irgacure 2959（1 mg），劇烈振蕩。用紫外光進(jìn)行光聚合。用乙醇和3%（250 mg）二苯酮及15%（1.5 mL）丙烯酸（AA）置換水。將混合物通入氬氣30秒后進(jìn)行紫外光照射。用乙醇洗滌微粒3次，再置于乙醇中。得微粒直徑為100 μm的產(chǎn)物刀豆蛋白。[2]
下游產(chǎn)物合成
CAS： 2797226-68-5。在手套箱中將N-烯丙基-N-羧酐（320 mg）溶解于無(wú)水THF中。向混合物中加入刀豆蛋白溶液（350 μL）。在氮?dú)鈿夥障掠?5°C進(jìn)行聚合反應(yīng)48小時(shí)。通過(guò)傅里葉變換紅外光譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成度。將N-辛基N-羧酐（550 mg）的THF溶液加入上述混合物中。室溫?cái)嚢?8小時(shí)直至完全轉(zhuǎn)化。觀察樣品溶液在過(guò)量醚中沉淀。離心處理樣品溶液數(shù)次。真空干燥溶液獲得產(chǎn)物。[3]
參考文獻(xiàn)
[1] Pussak, Daniel; et al Mechanical Carbohydrate Sensors Based on Soft Hydrogel Particles Angewandte Chemie, International Edition (2013), 52(23), 6084-6087
[2] Pussak, Daniel; et al Mechanical Carbohydrate Sensors Based on Soft Hydrogel Particles Angewandte Chemie, International Edition (2013), 52(23), 6084-6087
[3] Liu, Hao; et al Fabrication of Hierarchical Bioinspired Superstructures Bearing Different Charges and Tunable Ability to Promote Protein Crystallization Macromolecules (Washington, DC, United States) (2023), 56(24), 10037-10048