介紹
N-FMOC-N'-生物素-L-賴氨酸是一種帶有生物素修飾的保護型賴氨酸衍生物，廣泛應(yīng)用于固相肽合成（SPPS）中。分子式為C33H44N4O7S。外觀為白色至淺黃色粉末，易溶于DMF、DMSO等有機溶劑，水中溶解度有限。賴氨酸（Lys）側(cè)鏈氨基經(jīng)過生物素（Biotin）修飾，N端氨基則被FMOC（9-芴甲氧羰基）保護。生物素的強親和力使得該分子在生物分子標(biāo)記、親和純化及免疫檢測中有重要作用。此衍生物具備良好的合成穩(wěn)定性和高純度，適合用于肽鏈中引入生物素標(biāo)簽，實現(xiàn)多功能分子設(shè)計。賴氨酸主鏈氨基以FMOC保護，側(cè)鏈ε-氨基連接生物素，形成穩(wěn)定共價結(jié)構(gòu)。
圖一 N-FMOC-N'-生物素-L-賴氨酸
應(yīng)用
N-FMOC-N'-生物素-L-賴氨酸主要應(yīng)用于固相肽合成，作為生物素標(biāo)簽引入肽分子中，用于免疫檢測、蛋白質(zhì)-配體相互作用研究、生物素-親和素系統(tǒng)的構(gòu)建。其生物素標(biāo)簽便于后續(xù)親和純化和檢測步驟，廣泛應(yīng)用于抗體標(biāo)記、細胞標(biāo)記及生物傳感器開發(fā)。該衍生物也用于合成多功能肽和核酸-肽偶聯(lián)物，提升分子的識別與結(jié)合能力。
合成
以1.0 mmol規(guī)模合成Fmoc-Lys(biotin)-OH時，取386.9 mg 9-氟苯甲氧基羰基-L-丙氨酸鹽酸鹽與212 μL DIPEA溶于5-10 mL無水DMF，中和后加入418.5 mg 9-氟苯甲氧基羰基-L-丙氨酸鹽酸鹽，室溫避光攪拌4-8 h（TLC監(jiān)測反應(yīng)完全），35-40℃減壓濃縮至1-2 mL粘稠液，滴入預(yù)冷至-20℃的50 mL無水乙醚中沉淀，經(jīng)離心洗滌得粗產(chǎn)物，再通過硅膠柱層析（DCM/MeOH 10:1→8:1梯度洗脫）純化，35℃真空干燥4-6 h后獲白色粉末純品N-FMOC-N'-生物素-L-賴氨酸，得率65%-75%、HPLC純度≥95%，全程需保持無水體系，避免高溫破壞Fmoc保護基[1]。
圖二 N-FMOC-N'-生物素-L-賴氨酸的合成
參考文獻
[1]Ohno Y ,Vinogradov A A ,Suga H .Selective pH-Responsive Conjugation between a Pair of De Novo Discovered Peptides.[J].Journal of the American Chemical Society,2024,DOI:10.1021/JACS.4C08520.