(4-脒苯基)甲磺酰氟鹽酸鹽（常用縮寫p-APMSF）是生化與分子生物學領域經(jīng)典的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑，核心靶向胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，廣泛用于酶學鑒定、細胞與組織蛋白提取、凝血/補體通路研究及水產(chǎn)繁殖機制研究，是替代PMSF、DFP的高選擇性抑制劑工具藥。

應用研究

1、祝妮檢測了蛋白酶抑制劑對小菜蛾中腸酶活性的影響。當分別加入抑制劑(4-脒苯基)甲磺酰氟鹽酸鹽(APMSF)和L-1,4'-甲基磺?；?2-苯基乙基氯甲基酮(TPCK)時總蛋白酶的活性受到抑制;當以胰蛋白酶作為底物時，(4-脒苯基)甲磺酰氟鹽酸鹽對胰蛋白酶有顯著抑制作用，而L-1,4'-甲基磺?；?2-苯基乙基氯甲基酮抑制作用有限;當以胰凝乳蛋白酶作為底物時，而L-1,4'-甲基磺?；?2-苯基乙基氯甲基酮對胰凝乳蛋白酶有顯著抑制作用，對胰蛋白酶抑制作用不明顯。胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性的降低與基因轉錄水平的下降相一致，因此寄生后胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性的下降可能與絲氨酸蛋白酶基因轉錄水平的下降有關[1]。

2、Matsuwaki,Y.等人為探究上皮細胞對真菌的應答模式及其潛在作用機制。將人氣道上皮細胞系BEAS-2B與Calu-3（均購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心）分別與PAR-2多肽及多種真菌提取物共孵育，檢測細胞的各項應答指標，包括粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素8（IL-8）、嗜酸性粒細胞趨化因子、嗜酸性粒細胞趨化因子2及活化調節(jié)正常T細胞表達和分泌因子（RANTES）的分泌水平，以及細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。為明確參與該細胞應答的蛋白酶類型，實驗使用了胃蛋白酶抑制劑A、嗜熱堿性芽孢桿菌抑制劑（ATBI）、人類免疫缺陷病毒（HIV）蛋白酶抑制劑及(4-脒苯基)甲磺酰氟鹽酸鹽等多種蛋白酶抑制劑；同時通過PAR-2激動肽與拮抗肽，探究PAR-2在該過程中的作用[2]。

3、Ngernsoungnern等人為驗證對蝦釋放到海水中的內(nèi)源蛋白酶是否為卵激活所必需。研究讓雌蝦在添加了蛋白酶抑制劑的人工海水中產(chǎn)卵，結果發(fā)現(xiàn)，(4-脒苯基)甲磺酰氟鹽酸鹽（APMSF）和大豆胰蛋白酶抑制劑（SBTI）可顯著抑制卵激活，高劑量的兩種抑制劑處理下，卵的完全激活率僅為 1%~2%；且經(jīng)APMSF和SBTI處理后的卵子即便后續(xù)清洗，其激活過程也無法恢復。與之相反，胃蛋白酶抑制劑A、半胱氨酸蛋白酶抑制劑E-64和乙二醇四乙酸等其他蛋白酶抑制劑對卵激活無抑制作用，經(jīng)這些試劑處理的卵子完全激活率可達約98%。本研究結果表明，對蝦釋放到海水中的絲氨酸蛋白酶（極有可能為胰蛋白酶樣蛋白酶）可能參與了斑節(jié)對蝦的卵激活過程[3]。

參考文獻

[1] 祝妮. 小菜蛾中腸絲氨酸蛋白酶基因的克隆、轉錄及其酶活的研究[D]. 浙江:浙江大學,2013.

[2] Matsuwaki,Y., Wada,K., White,T., et al. Alternaria fungus induces the production of GM-CSF, interleukin-6 and interleukin-8 and calcium signaling in human airway epithelium through protease-activated receptor 2[J]. International archives of allergy and immunology,2012,158(S1):19-29. DOI:10.1159/000337756.

[3] Ngernsoungnern, Piyada, Sretarugsa, Prapee, Ngernsoungnern, Apichart. Alteration of egg activation by protease inhibitors in the black tiger shrimp, Penaeus monodon[J]. Invertebrate Reproduction & Development,2015,59(4):206-211. DOI:10.1080/07924259.2015.1086827.