BOC-L-天冬酰胺 4-硝基苯酯為N-叔丁氧羰基保護的L-天冬酰胺羧基活化衍生物，為肽合成領域常用的氨基酸活性酯。英文別名：Boc-Asn-ONp，白色結晶性固體，易溶于二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯等有機溶劑，微溶于水；對光敏感，需避光密封保存。
制備方法
第一步：BOC保護L-天冬酰胺的氨基
溶解：將L-天冬酰胺（1eq）溶于無水THF與水的混合體系（體積比3:1），冰浴冷卻至0-5℃。
加堿與保護劑：緩慢加入三乙胺（1.2eq）調節(jié)pH至8-9，再逐滴加入二碳酸二叔丁酯（1.1eq）的THF溶液，維持溫度0-5℃。
反應：冰浴反應1小時后，升溫至室溫（20-25℃）繼續(xù)攪拌4-6小時，直至TLC（展開劑：乙酸乙酯/石油醚=1:1）檢測原料點（L-天冬酰胺）消失。
后處理：減壓濃縮除去THF，剩余水溶液用1mol/L鹽酸調節(jié)pH至2-3，用乙酸乙酯萃?。?×50mL），合并有機相，用飽和食鹽水洗滌（2×30mL），無水硫酸鈉干燥，過濾后濃縮，得到白色固體BOC-L-天冬酰胺（收率約85-90%）。
第二步：羧基活化與4-硝基苯酯合成
溶解：將BOC-L-天冬酰胺（1eq）和4-硝基苯酚（1.2eq）加入干燥的二氯甲烷中，攪拌溶解，冰浴冷卻至0℃。
加縮合劑：緩慢加入N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺（1.1eq）的二氯甲烷溶液，攪拌均勻后，維持0℃反應2小時，再升溫至室溫反應12-18小時（避光，防止4-硝基苯酚降解）。
除雜質：反應結束后，過濾除去生成的二環(huán)己基脲（DCU，白色沉淀），濾液減壓濃縮至干，得到BOC-L-天冬酰胺 4-硝基苯酯粗產物。
第三步：純化與表征
重結晶純化：將BOC-L-天冬酰胺 4-硝基苯酯粗產物溶于少量熱乙酸乙酯，加入石油醚至溶液出現(xiàn)渾濁，冷卻至0-5℃靜置析晶，過濾得到白色針狀晶體，重復1-2次以提高純度。
柱層析純化（可選）：若重結晶后純度不足，采用硅膠柱層析，展開劑為乙酸乙酯/石油醚（體積比 2:1），收集目標餾分，濃縮后得到BOC-L-天冬酰胺 4-硝基苯酯純品。
結構驗證：通過薄層色譜（TLC，Rf值約0.4-0.5，展開劑：乙酸乙酯/石油醚=2:1）、熔點測定（文獻值約158-160℃）、紅外光譜（IR，特征峰：1750cm?1附近為BOC羰基吸收，1600cm?1附近為硝基吸收，1250cm?1附近為酯鍵吸收）確認為BOC-L-天冬酰胺 4-硝基苯酯結構[1]。
參考文獻
[1] BRUZZESE T, CEDRO A, VAN DEN HEUVEL H H. Peptides correlated to lysozyme: US 4784988(P). 1988-11-15.