FMOC-D-4-硝基苯丙氨酸（Fmoc-D-Phe(4-NO?)-OH，CAS：177966-63-1）是D-構(gòu)型苯丙氨酸的芳香族硝基取代衍生物，以N-α位芴甲氧羰基（Fmoc）為氨基保護基，是多肽合成（尤其Fmoc 固相合成）中構(gòu)建含D-芳環(huán)殘基序列的關(guān)鍵砌塊，廣泛用于藥物化學(xué)、生物活性肽與手性探針的研發(fā)。
合成應(yīng)用
1、大環(huán)四肽通過先固相合成線性前體、再液相環(huán)化的組合方法合成。線性多肽前體D-aa-Phe-D-Pro-Phe（其中D?aa=D?Trp(R)或D?Phe (R)）按已有方法在2?氯三苯甲基氯樹脂上合成，并采用已報道的通用方法進行環(huán)化反應(yīng)。將線性多肽前體，如FMOC-D-4-硝基苯丙氨酸、Fmoc-L-苯丙氨酸或Fmoc-D-脯氨酸（25mM，0.5當(dāng)量）分步溶于DMF，以1mL/h的速率逐滴加入溶有0.75當(dāng)量HATU與4當(dāng)量DIEA的DMF溶液中（最終多肽濃度為0.6mM）。滴加完畢后，向反應(yīng)液中直接補加第二份HATU（0.75當(dāng)量）與4當(dāng)量DIEA，再以相同速率（1mL/h）逐滴補加溶于DMF的線性多肽（25mM，0.5當(dāng)量，最終多肽濃度1.2mM）。隨后將反應(yīng)液在室溫下攪拌6–10h；若HPLC顯示反應(yīng)未完全，則補加適量HATU與DIEA，繼續(xù)反應(yīng)1h。減壓蒸除DMF，加入二氯甲烷后濾去不溶性副產(chǎn)物，得到粗品環(huán)肽。采用快速柱層析純化：以乙酸乙酯/石油醚體系進行線性梯度洗脫（10%–80%乙酸乙酯，15min，流速30mL/min）；餾分濃縮后，從乙腈水溶液中凍干得到純品環(huán)肽。如親水性更強的多肽17和18采用反相HPLC純化，經(jīng)凍干得到純品[1]。
2、向51.3g（0.119mol）化合物FMOC-D-4-硝基苯丙氨酸的懸浮液（溶劑為800mL異丙醇與600mL水）中依次分批加入少量鹽酸與鋅粉。加熱反應(yīng)體系，原料逐漸溶解。通過薄層色譜（TLC）監(jiān)測原料消耗情況。反應(yīng)結(jié)束后，在減壓、pH=1條件下蒸除體系中的異丙醇。將所得沉淀置于20%鹽酸中回流煮沸6h。冷卻后，所得懸浮液用乙酸鈉水溶液中和至pH4–5。過濾收集沉淀并干燥。收率：化合物4a為89%，化合物4b為87%；熔點：4a為214–215℃，4b為218–219℃[2]。
參考文獻
[1]Aldrich JV,Yakovlev DY,Coleman JS,Senadheera SN,Stacy HM,Eans SO,Knapp BI,Bidlack JM,McLaughlin JP.Optimization of the Macrocyclic Tetrapeptide[D-Trp]CJ-15,208 to Prevent Stress-Induced Relapse of Cocaine-Seeking Behavior. Molecules. 2025; 30(19):3993.https://doi.org/10.3390/molecules30193993
[2]Tolstyakov, V.V., Tolstobrova, E.S., Zarubina, O.S. et al. Synthesis of new tetrazolyl derivatives of L- and D-phenylalanine.Russ J Org Chem 52, 1681–1685 (2016). https://doi.org/10.1134/S1070428016110221