NA-P-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽是經(jīng)典的絲氨酸蛋白酶特異性底物，廣泛用于酶活測定與生化研究。NA-P-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽的英文名稱：Nα-p-Tosyl-L-arginine methyl ester hydrochloride（縮寫：TAME·HCl），白色結(jié)晶性粉末，易溶于水、甲醇；溶于乙醇、DMSO。其側(cè)鏈胍基是與胰蛋白酶等酶活性中心結(jié)合的關(guān)鍵基團(tuán)，因此常用于胰蛋白酶活性測定。
應(yīng)用
1、專利CN202310602952.X提出了一種胰蛋白酶活性檢測試劑，包括苯酚紅、胰蛋白酶特異性底物和弱堿試劑；所述胰蛋白酶特異性底物為NA-P-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽(TAME·HCl)或BAEE·HCl。本發(fā)明還提出了一種胰蛋白酶活性檢測方法，包括：(1)制備胰蛋白酶活性檢測試劑；(2)預(yù)處理；(3)檢測參比溶液，平均吸光度變化值記為Δ0；(4)標(biāo)準(zhǔn)品濃度記為C標(biāo)；平均吸光度變化值記為Δ標(biāo)；(5)待測組分的胰蛋白酶濃度記為C樣；平均吸光度變化值記為Δ樣；(6)U樣＝U標(biāo)*活性比值，活性比值＝[(Δ樣?Δ0)*稀釋倍數(shù)/C樣]/[(Δ標(biāo)?Δ0)*稀釋倍數(shù)/C標(biāo)]*100％。本發(fā)明的胰蛋白酶活性檢測試劑和方法，其檢測胰蛋白酶活性的準(zhǔn)確度較高[1]。
2、楊代勤等人進(jìn)行了黃鱔喜食的天然動(dòng)物性餌料蚯蚓、鰱肌肉和配合飼料對(duì)黃鱔消化酶活性影響的比較研究。其中，胰蛋白酶活性的測定：以NA-P-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽(TAME)作底物,先將29.0mg TAME和222mg CaCl2溶于100mL 0.05mol/L、pH9.0 Tris-HCl緩沖液中,35℃預(yù)熱,加入0.2mL粗酶液,立即混合均勻,并計(jì)時(shí),于247nm波長處測吸光值(A),每隔30s讀一次數(shù),共計(jì)2min,根據(jù)時(shí)間-吸光值的關(guān)系曲線中的直線部分,任選一時(shí)間間隔與相應(yīng)的吸光值的增量(△A)來計(jì)算胰蛋白酶活性。胰蛋白酶活性大小用1g新鮮組織在35℃、pH9.0條件下,1min內(nèi)所產(chǎn)生的吸光值的變化量(增量)來表示[△A247?(g?min)-1][2]。
參考文獻(xiàn)
[1] 上海品峰醫(yī)療科技有限公司. 一種胰蛋白酶活性檢測試劑和活性檢測方法:CN202310602952.X[P]. 2023-08-04.
[2] 楊代勤,嚴(yán)安生,陳芳,等. 不同飼料對(duì)黃鱔消化酶活性的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào),2003,27(6):558-563. DOI:10.3321/j.issn:1000-0615.2003.06.009.