簡介

三丙酸甘油酯常溫下為穩(wěn)定的無色油狀脂類液體，可與緩沖液、有機溶劑良好混溶；其主要用作CRL酶活性檢測的專用底物，在滴定監(jiān)測體系中發(fā)生水解反應(yīng)生成對應(yīng)產(chǎn)物，以此精準測定酶的催化活性。

三丙酸甘油酯的性狀

合成

稱取丁酸（80 mmol，7.04 g）、甘油（10 mmol，0.92 g）和1-磺丁基-3-甲基咪唑硫酸氫鹽（相對于總底物質(zhì)量為5%w/w，0.40 g）放入圓底燒瓶中。反應(yīng)混合物在100°C~130°C的恒溫控制油浴中進行磁力攪拌2小時。完成后，在劇烈混合下使用20mL正己烷和20mL去離子水對粗產(chǎn)物進行液-液萃取得到標題化合物三丙酸甘油酯[1]。

用途

三丙酸甘油酯在該催化加氫反應(yīng)體系中作為反應(yīng)助劑/功能性輔料，配合催化劑與溶劑參與反應(yīng)體系構(gòu)建，輔助完成苯胺相關(guān)催化合成并用于后續(xù)檢測純化。例如：向裝有攪拌棒的8mL玻璃小瓶中裝入取代苯胺（0.5mmol）、作為內(nèi)標的正十六烷（50mg）、[Ru（acac）3]（2-4mol%）、三磷酸鹽（3-6mol%）、作為溶劑的THF（2mL）、三丙酸甘油酯和新制備的0.2M助催化劑HNTf2（5-10mol%）的THF溶液。用裝有注射器的隔膜蓋住反應(yīng)瓶。將小瓶放在合金板上。將小瓶放入300毫升高壓釜中。密封后，用30巴氫氣吹掃高壓釜三次。將高壓釜加壓至60巴。將高壓釜放入鋁塊中。將高壓釜預(yù)熱至130°C。18小時后，在冰浴中冷卻高壓釜。小心地釋放剩余的氣體。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物。通過GC和GC-MS分析反應(yīng)混合物。通過硅膠柱色譜法（正庚烷/乙酸乙酯混合物）純化反應(yīng)混合物[2]。

此外，三丙酸甘油酯在此酶活測定實驗中作為反應(yīng)底物，用于測定CRL酶活性并生成相應(yīng)水解產(chǎn)物。例如：使用自動滴定儀pH-Stat進行CRL的標準活性測定。保持反應(yīng)混合物含有25 mM pH 7.0的tris-HCl緩沖液和100 mM NaCl（18.4 mL）、乙腈（0.6 mL）和三丙酸甘油酯（1 mL）。機械攪拌混合物，使三丙酸甘油酯和CRL均勻分散。通過加入水中溶解的CRL提取物（儲備溶液：10mg/mL；樣品：20-100μL）開始反應(yīng)。在室溫下監(jiān)測反應(yīng)600秒。使用100 mM NaOH標準溶液作為滴定劑，通過滴定儀將pH值保持在7.0，以獲得二丙瑞寧和丙酸[3]。

參考文獻

[1] Synthesis of tributyrin and tripropionin and their alleviative effects on colitis and gut microbiota in mice By: Huang, Shouhe; et al. Chemical Engineering Journal (Amsterdam, Netherlands) (2025), 516, 164178.

[2] Esters, Including Triglycerides, and Hydrogen as Feedstocks for the Ruthenium-Catalyzed Direct N-Alkylation of Amines By: Adam, Rosa; et al. Angewandte Chemie, International Edition (2016), 55(37), 11049-11053.

[3] Stepping into the biocatalysis lab for undergraduate students: from enzyme immobilization to product isolation By: Robescu, Marina S.; et al. Journal of Chemical Education (2024), 101(7), 2790-2795.