背景技術(shù)

3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸又名7-酮石膽酸，是制備熊去氧膽酸的重要中間體。而熊去氧膽酸是名貴中藥熊膽的主要有效成分，具有增加膽汁酸分泌、并使膽汁成分改變、降低膽汁中膽固醇及膽固醇脂等功效，主要用于治療膽石疾病。眾所周知，熊膽是一種非常稀缺的資源，原因在于其獲取的傳統(tǒng)途徑主要是依賴于人工養(yǎng)殖活熊取膽的方法。目前，這種周期長、收率低且不人道的傳統(tǒng)途徑逐漸被人工合成方法所取代，而現(xiàn)知的人工合成熊去氧膽酸的方法中，3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸都是極為重要的中間體。

目前3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸的工業(yè)化生產(chǎn)多采用化學(xué)法，但是存在操作條件苛刻、選擇性低、污染環(huán)境、使用大量有機(jī)溶劑、存在有機(jī)溶劑殘留、有毒有害等缺點(diǎn)。為了解決化學(xué)法存在的諸多缺點(diǎn)，人們另辟蹊徑，尋找更好的生產(chǎn)途徑。中國發(fā)明專利CN1912192B公開了一種采用電化學(xué)合成制備3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸的方法，但是此種方法依然需要使用有機(jī)溶劑，并且成本較高。中國發(fā)明專利申請CN105368828A公開了一種采用全細(xì)胞催化制備3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸的方法，但是此種方法需進(jìn)行細(xì)胞發(fā)酵培養(yǎng)，存在反應(yīng)時(shí)間長、操作繁瑣、產(chǎn)物復(fù)雜等缺點(diǎn)。

合成方法

總體系1L，取50g含量為99%的鵝去氧膽酸，懸浮于100mM的磷酸鉀緩沖液（pH8.0），用10M NaOH的調(diào)節(jié)pH到8.0后加入終濃度30g/L的丙酮酸鈉，并依次加入0.09g7α-類固醇脫氫酶凍干粉（Y157W突變體酶）和0.07g乳酸脫氫酶凍干粉，最后加入終濃度為0.1g/L的NAD，底物終濃度為50g/L。在25℃、250rpm和pH8.0左右進(jìn)行反應(yīng)6h，轉(zhuǎn)化率達(dá)99.8%。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液滴加鹽酸溶液至pH為1.2，繼續(xù)攪拌30min后待冷卻過濾、經(jīng)水洗三次后真空干燥得到3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸成品58g。成品用900ml無水乙醇60℃水浴條件下攪拌回流1h，過濾取濾液進(jìn)行真空減壓濃縮至200ml體積，再加入1L純水?dāng)嚢?h，過濾，將濾餅真空干燥過夜即得3Α-羥基-7-氧代-5Β-膽烷酸精制品52g[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 眉山市新功生物科技有限公司,邦泰生物工程(深圳)有限公司. 一種3α-羥基-7氧代-5β-膽烷酸的制備方法及其制備用酶3:CN201710012411.6[P]. 2018-08-24.