背景及概述

分離液是一類具有特定密度、滲透壓與化學(xué)惰性的無(wú)菌溶液，核心用于密度梯度離心，實(shí)現(xiàn)混合體系中細(xì)胞、生物大分子或顆粒的高效分離，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)及臨床診斷領(lǐng)域。

應(yīng)用

分離液最主流用途是細(xì)胞分離[1]，尤以人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）分離為代表。其密度通常為1.077g/mL（20℃），與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞密度匹配；紅細(xì)胞與粒細(xì)胞密度更高（約1.092g/mL），離心后沉于管底，血小板密度更低（1.030–1.035g/mL），懸浮于上層，從而實(shí)現(xiàn)PBMC的高純度富集。

在免疫學(xué)研究中，分離液用于獲取T/B/NK細(xì)胞，開(kāi)展亞群分析、功能檢測(cè)與表面標(biāo)記鑒定。在臨床診斷中，用于制備淋巴細(xì)胞參考品，支撐流式檢測(cè)試劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)；腫瘤學(xué)領(lǐng)域可富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞，提升細(xì)胞學(xué)檢測(cè)靈敏度。在細(xì)胞治療中，如CAR-T制備，分離液是從患者血液中分離T細(xì)胞的關(guān)鍵試劑，為后續(xù)基因修飾與回輸?shù)於ɑA(chǔ)。此外，還用于骨髓、臍帶血干細(xì)胞分離，以及細(xì)胞器、病毒顆粒的純化。

制備方法

以最常用的Ficoll?Hypaque分離液為例，核心成分為聚蔗糖與泛影葡胺，制備流程如下：稱取60gFicoll400，加入800mL無(wú)菌去離子水，室溫?cái)嚢柚镣耆芙?，定容?L，得6%Ficoll溶液，密度約1.020g/mL。取340g/L泛影葡胺溶液，按比例滴加至Ficoll溶液中，邊加邊攪拌，20℃下校準(zhǔn)密度至1.077±0.001g/mL。用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，添加0.01%疊氮鈉或50μg/mL慶大霉素防腐，4℃避光儲(chǔ)存，有效期6–12個(gè)月。Percoll分離液（硅膠顆粒包被PVP）適用于高密度細(xì)胞（如紅細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞）分離，通過(guò)調(diào)節(jié)Percoll與緩沖液比例，配制1.050–1.130g/mL梯度液，高壓滅菌后使用。

圖1 分離液制備示意圖

分離液憑借精準(zhǔn)密度調(diào)控、生物相容性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，成為生命科學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)工具。其制備關(guān)鍵在于密度精準(zhǔn)校準(zhǔn)、無(wú)菌控制與穩(wěn)定性優(yōu)化。隨著細(xì)胞治療與精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)發(fā)展，分離液正向無(wú)動(dòng)物源、低內(nèi)毒素、定制化密度方向發(fā)展，以滿足更高標(biāo)準(zhǔn)的科研與臨床需求。

參考文獻(xiàn)

[1]Lawton, Philippe; Mancassola, Roselyne; Naciri, Muriel; Petavy, Anne-Francoise.Use of Percoll for the infection of cells in vitro with Cryptosporidium parvum oocysts.[J]Journal of Microbiological Methods, 2001, vol. 46, # 1, p. 81 - 84, 10.1016/S0167-7012(01)00265-2(opens in a new window)