背景[1-6]
SilverXpress Silver Staining Kit是一種高靈敏度的銀染試劑盒，具有納克級靈敏度，背景最小。其易于遵循的方案比標準的Coomassie®染色需要更少的總時間，并且在1小時內完成。SilverXpress Silver Staining Kit使用氨性銀化學和戊二醛致敏產生高度敏感的銀染色，能夠檢測比標準Coomassie®或膠體藍技術低得多的蛋白質。清晰的背景使樣品識別明確無誤，并提供出版品質的凝膠。
特點[1]
銀染試劑盒的特點：
•靈敏的銀染試劑—可檢測低至0.25ng的蛋白；具有和其他品牌單色金屬銀染產品相同或更好的靈敏度
•背景干凈—對蛋白凝膠進行強染色，背景顏色、陰影和著色異常極低
•性能優(yōu)越—試劑及實驗方案均經過優(yōu)化，即使用戶技術差異很大，也可確保獲得良好的染色結果
•快速靈活的實驗方案—整個常規(guī)流程耗時約1.5小時，某些步驟可過夜進行或縮短，對結果基本沒有影響
•凝膠兼容性—兼容多種商業(yè)化預制小型凝膠及SDS-PAGE緩沖液系統(tǒng)，獲得極佳的染色效果
•流程兼容性—溫和的化學配方確保兼容質譜分析、測序及其他需要進行脫色和蛋白回收的下游應用
SilverXpress Silver Staining Kit是一種金屬銀（Ag）蛋白染料，可獲得極其干凈和均勻的凝膠背景，每次使用均可獲得一致的高靈敏度染色結果。在標準小型凝膠中，可檢測蛋白含量高于0.25ng的條帶或印跡。實驗流程經過優(yōu)化，可靈活進行短時間或過夜固定和染色，而不會影響染色效果（靈敏度或清晰度）。在凝膠固定后進行短時間（一分鐘）敏化有助于獲得無暗影或污點背景的染色結果，有助于對銀染凝膠進行光密度分析，這是自制或其他商業(yè)化銀染產品無法實現(xiàn)的。
其他特點：
•凝膠固定步驟可在30分鐘內完成或放置過夜
•凝膠染色可在5分鐘到20小時內完成（視靈敏度而定）嚴格的生產流程及周密的質量測試確保Pierce銀染試劑盒在每次使用中均可獲得出色結果，不受聚丙烯酰胺凝膠類型或所用緩沖液系統(tǒng)的影響。大多數(shù)納克或低于納克級蛋白均可輕松檢測，背景信號水平極低（參見本介紹最后的其他信息部分）。實驗流程清楚說明了如何將固定和染色步驟延長至過夜而不影響效果，這進一步增強了便利性。同樣，默認的30分鐘染色步驟也可縮短至5分鐘，從而在凝膠固定后20分鐘內完成染色。
銀染法通常使用戊二醛或甲醛，這些成分會造成蛋白間及蛋白和凝膠基質間發(fā)生共價交聯(lián)，而這種交聯(lián)從某種意義上來說會抑制從凝膠上提取或洗脫蛋白。Pierce銀染方法在染色及顯影溶液中使用了甲醛，不過其濃度極低，將不可逆蛋白交聯(lián)降到最低。而在用于質譜的Pierce銀染試劑盒(產品貨號24600)實驗方案中，我們使用了相同的銀染試劑，不過進行了些一定程度的優(yōu)化，以提高回收率而不影響靈敏度。
應用[7][8]
用于新癌基因NGAL的新型TPA反應激活蛋白的分離與初步鑒定。
應用寡核苷酸親和層析法,改進后的寡核苷酸親和層析法和離心管層析法從TPA誘導后的食管癌細胞EC109中分離調控NGAL誘導表達的TPA反應激活蛋白,通過EMSA、SDS-PAGE結合銀染判定這三種方法的優(yōu)缺點,并應用生物質譜結合生物信息學等手段對這些蛋白進行初步鑒定。寡核苷酸親和層析法能夠分離純化一定豐度的TPA反應激活蛋白,但存在較多Tween 20的干擾;離心管層析法操作流程簡單,快捷,但獲得的激活蛋白較少,不利于下一步的質譜鑒定;改進后的寡核苷酸親和層析法排除了Tween 20的干擾,能夠分離純化低背景、高豐度的激活蛋白。通過生物質譜并結合生物信息學等手段分析,初步篩選出12個調控NGAL誘導表達的TPA反應激活蛋白,這其中大部分為尚未報道的新型TPA反應激活蛋白。通過本實驗,建立了穩(wěn)定的改進后寡核苷酸親和層析法技術平臺,并初步篩選出12個調控NGAL表達的新型TPA反應激活蛋白。
參考文獻
[1]Methods for transcription factor separation.Robert A,Harry W.Journal of Chromatography.2003
[2]Affinity purification of DNA-binding proteins.Gadgil H,Shilpa A,Harry W.Journal of Biochemical and Biophysical Methods.2001
[3]The High Molecular Weight Urinary Matrix Metalloproteinase(MMP)Activity Is a Complex of Gelatinase B/MMP-9 and Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin(NGAL).Yan Li,Niels Borregaard,Lars Kjeldsen.Journal of Biological Chemistry.2001
[4]Oligonucleotide trapping method for purification of transcription factors.Gadgil H,Harry W.Journal of Chromatography.2002
[5]Isolation of DNA-protein complexes based on streptavidin and biotin interaction.Leblond-Francillard M,Dreyfus M,Rougeon F.European Journal of Biochemistry.2001
[6]Covalent attachment of DNA to agarose.Improved synthesis and use in affinity chromatography.Arndt-Jovin DJ,Jovin TM,Bahr W,et al.European Journal of Biochemistry.1975
[7]Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin and homologous proteins in rat and mouse.Kjeldsen L,Cowland JB,Borregaard N.Biochimica et Biophysica Acta.2000
[8]繆成貴. 新癌基因NGAL的新型TPA反應激活蛋白的分離與初步鑒定[D].吉林大學,2007.