棕櫚酸對(duì)硝基苯酯別名：4-硝基苯基棕櫚酸酯，縮寫pNPP，白色至淺米黃色結(jié)晶粉末，不溶于水；易溶于氯仿、二氯甲烷、DMF、異丙醇、熱乙醇。棕櫚酸對(duì)硝基苯酯是活化羧酸衍生物，可與胺、醇發(fā)生轉(zhuǎn)酯/酰胺化反應(yīng)，用于長(zhǎng)鏈脂肪酸酰胺、脂質(zhì)衍生物合成；硝基可還原為氨基，進(jìn)一步修飾。
應(yīng)用研究
李璟等人采用易錯(cuò)PCR方法對(duì)枯草芽孢桿菌脂肪酶基因lipaseA進(jìn)行定向進(jìn)化，并首次采用棕櫚酸對(duì)硝基苯酯（pNPP）法進(jìn)行96孔板高通量篩選。結(jié)果表明：第一輪易錯(cuò)PCR沒(méi)有產(chǎn)生隨機(jī)突變，第二輪易錯(cuò)PCR反應(yīng)在Mn2＋濃度為0.2mmol·L-1時(shí)，產(chǎn)生了突變菌株。對(duì)該條件下構(gòu)建的文庫(kù)中124株突變菌株進(jìn)行棕櫚酸對(duì)硝基苯酯高通量篩選，突變株4B2的吸光度值A(chǔ)405為1.395，與未突變株P(guān)ET32a-lipaseA（A405＝0.448）差異顯著。測(cè)序結(jié)果表明，突變株4B2脂肪酶基因lipaseA有5個(gè)核苷酸位點(diǎn)發(fā)生了突變，其中3個(gè)是同義突變，2個(gè)是錯(cuò)義突變，分別是82位的天冬酰胺（AAU）突變?yōu)槔野彼幔║AU），143位的賴氨酸（AAG）突變?yōu)樘K氨酸（ACG）。突變株4B2發(fā)酵上清液轉(zhuǎn)化生物柴油的轉(zhuǎn)酯效率較對(duì)照菌PET 32a-lipaseA有明顯提高，前者為79.5％，后者為49.72％。本研究為枯草芽孢桿菌脂肪酶lipaseA轉(zhuǎn)酯活性位點(diǎn)的探索奠定了基礎(chǔ)[1]。
付顯鋒等人建立了一種新的有機(jī)相脂肪酶轉(zhuǎn)酯化活性測(cè)定方法。以正己烷為溶劑，脂肪酶催化棕櫚酸對(duì)硝基苯酯和正丁醇的轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)為模型反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液中310nm下吸光值的變化計(jì)算反應(yīng)轉(zhuǎn)化率。以氣相色譜法對(duì)新建的紫外分光光度法進(jìn)行驗(yàn)證，分別采用這兩種方法測(cè)定了七種商品化脂肪酶的轉(zhuǎn)酯化活性，兩種方法所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。利用紫外分光光度檢測(cè)法考察了Lipozyme TL IM脂肪酶催化轉(zhuǎn)酯化的時(shí)間進(jìn)程及合成活性與酶量的關(guān)系，并對(duì)Lipozyme TL IM催化轉(zhuǎn)酯化的性質(zhì)(最適溶劑、?；荏w特異性、醇耐受性、最優(yōu)反應(yīng)溫度和熱力學(xué)穩(wěn)定性)進(jìn)行了表征[2]。
參考文獻(xiàn)
[1] 李璟,童晉,羅明銀,等. 枯草芽孢桿菌脂肪酶基因 lipaseA突變文庫(kù)構(gòu)建及其生物柴油轉(zhuǎn)酯研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2016,28(5):864-869. DOI:10.3969/j.issn.1004-1524.2016.05.25.
[2] 付顯鋒,鄭建永,應(yīng)向賢,等. 紫外分光光度法表征Lipozyme TL IM脂肪酶轉(zhuǎn)酯化活性[J]. 催化學(xué)報(bào),2014(4):553-559. DOI:10.1016/S1872-2067(14)60053-X.