背景及概述[1][2]
款冬花提取物，為倍半萜類化合物，來源于來源于菊科植物款冬花(Tussilago farfara L.)的花蕾。款冬花具有潤肺下氣，化痰止嗽等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，款冬花對呼吸系統(tǒng)具有止咳，祛痰和平喘作用；對交感神經(jīng)、擬交感神經(jīng)、血管平滑肌等具有直接興奮作用；對在體或離體胃腸道平滑肌均呈抑制作用?？疃ǚ植己颖?、河南、湖北、四川、山西、陜西、甘肅、內(nèi)蒙古、新疆、青海，西藏等地，資源豐富。
款冬花提取物有效成分為款冬花酮，無色膠狀物，以及新款冬花內(nèi)酯?？疃ㄍ托驴疃▋?nèi)酯均為款冬花提取物的有效成分，有較強的抑制血小板活化因子的作用，能抑制PAF誘導(dǎo)的血小板聚集。
應(yīng)用[3]
1.款冬花提取物噴霧劑的制備
準(zhǔn)確稱量款冬花提取物1.00g加入研缽中，加入2％的吐溫-80置于上述研缽中，研 磨混合均勻，之后邊加入0.9％生理鹽水邊研磨至混合均勻制成5mg/mL初乳，將上述初乳轉(zhuǎn) 移至高速組織搗碎勻漿機(jī)中；準(zhǔn)確稱取維生素C 0.1g(抗氧化劑)加入到高速組織搗碎勻漿 機(jī)中；18000rpm/min攪拌速度下乳化3分鐘后將其轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中，于150MPa壓力下循 環(huán)均化3次，得白色均一乳狀液；將制備的乳劑封裝于噴霧器中，每瓶100mL，含款冬花提取 物500mg，置于涼暗處儲存。
2.含有款冬花提取物的羊毛處理劑
取新鮮的款冬花、蘆薈、百合、金銀花各10kg，分別搗碎后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的乙醇水溶液100kg，溫度設(shè)定為60℃，提取時間為3h。提取后過濾，過濾后將上清液分別真空濃縮至20kg。則獲得了款冬花提取物、蘆薈提取物、百合提取物及金銀花提取物。再取款冬花提取物2kg、蘆薈提取物6kg、百合提取物2kg、金銀花提取物6kg、水180kg，合并后攪拌均勻得到羊毛處理劑。
制備 [2]
取干燥的款冬花蕾1kg粉碎，加4L石油醚(餾程60-90℃)常溫浸泡5h，超聲提取3 次，每次60min，提取液過濾，減壓濃縮至干燥，得浸膏1.31g，即得款冬花應(yīng)用于哮喘治療的 提取物。
冬花提取物的核磁共振(1H-NMR)分析：
取實施例1中提取物20mg，加入氘代氯仿800μL溶解，取600μL上清液加入5mm核磁 管中，進(jìn)行核磁共振1H-NMR分析(圖1)。結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)報道和標(biāo)準(zhǔn)品對照，對提取物中含有 的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)指認(rèn)，鑒定的化合物結(jié)構(gòu)如圖2所示。
圖1
圖二
款冬花提取物相指紋圖譜研究：
取實施例1中款冬花提取物25mg溶于1.5mL色譜甲醇中，微孔濾膜過濾，采用如下 條件進(jìn)行高效液相檢測，結(jié)果如圖5所示。
色譜條件：Agilent 1260高效液相色譜檢測儀；艾杰爾VenusiIMP C18(5μm,4.6× 250mm)色譜柱。流動相A乙腈，流動相B 0.03％甲酸水；檢測波長：220nm；流速1ml/min；柱溫 25℃，進(jìn)樣量10微升。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品對照，該提取物中含有化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)式如圖6所示。
表1洗脫梯度表
通過款冬花提取物制備款冬花酮和新款冬花內(nèi)酯，取10kg款冬花的花蕾粉碎后用90%乙醇超聲提取2次，合并提取液加入4‰針劑類藥用活性炭脫色，濾出活性炭，提取液減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入80目硅膠層析柱，用二氯甲烷?甲醇（1:5）洗脫，薄層跟蹤，收集洗脫液，濃縮干燥得款冬花提取物；
取正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水（7：8：5：3）置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相，取樣品溶于下相中，用泵將固定相灌滿分離柱，然后使主機(jī)轉(zhuǎn)動達(dá)到850rpm，以2.5ml/min流速泵入流動相，當(dāng)流動相流出時，開始連續(xù)進(jìn)樣，根據(jù)檢測器譜圖分別收集款冬花酮流分和新款冬花內(nèi)酯流分，濃縮，低溫干燥即得到款冬花酮和新款冬花內(nèi)酯，檢測含量都在98%以上。
主要參考資料
[1] 趙強, 王飛, 王迎進(jìn), & 趙二勞. (2012). 款冬花提取物對亞硝化反應(yīng)的抑制作用. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 40(9), 61-63.
[2] 李長田, 劉延鵬, 賀鳳辰, & 李玉. (2012). 長白山新記錄種款冬花提取物體外抗氧化活性研究(英文). Chinese Journal of Natural Medicines(4), 260-262.
[3] 賀潤麗, 王曉英, 韓毅麗, 尚彩玲, & 苗得雨. (2016). 款冬花不同部位提取物鎮(zhèn)咳祛痰作用研究. 時珍國醫(yī)國藥(1), 77-79.