概述^[1][2]

蟾蜍二烯內(nèi)酯類化合物是從中華大蟾蜍的皮膚中分離得到的一類重要的化合物。它們的主要結(jié)構(gòu)特征是甾體A/B環(huán)順式結(jié)構(gòu)、C/D環(huán)順式結(jié)構(gòu)，并且在C17位有一個(gè)吡喃酮環(huán)。這一類化合物除了具有有效的強(qiáng)心作用外，還表現(xiàn)出來一系列其它的生物活性，如表面麻醉、抗菌、抗腫瘤等活性。蟾蜍表皮腺體的分泌物經(jīng)過干燥得到蟾酥——主要成分是多種蟾蜍二烯內(nèi)酯類化合物，進(jìn)來的研究表明，偽異沙蟾毒精在抗腫瘤方面表現(xiàn)出獨(dú)特的作用機(jī)制，值得進(jìn)一步深入研究。

制備^[1-2]

方法1：以沙蟾毒精為原料，得偽異沙蟾毒精的途徑，總產(chǎn)率達(dá)到47%。

方法2：稱取蟾皮10Kg，剪碎，以95％乙醇按照1：10的料液比于80℃分別提取3次，每次提取時(shí)間為120分鐘，合并濾液，濾液減壓濃縮至10L，上XAD-4大孔樹脂(羅門哈斯公司)，先依次用水和30％乙醇洗去雜質(zhì)，再用95％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，干燥得到蟾蜍內(nèi)酯提取物125g。

取蟾蜍內(nèi)酯提取物75g，經(jīng)制備型HPLC分離(色譜柱：WatersXterraC18，流動(dòng)相為A：0.1％甲酸水；B：0.1％甲酸乙腈，梯度條件：5％B～25％B，30min；25％B～50％B，22min；50％B～95％B，18min；95％B，5min，300nm)，1min收集一個(gè)餾分，共收集75個(gè)餾分(Fr.1～Fr.75)。Fr.24回收溶劑，經(jīng)Click-CD柱(大連化物所研發(fā))分離(梯度條件為：95％B～60％B，40min，其中A：0.1％甲酸水；B：0.1％甲酸乙腈，檢測波長300nm)，收集其中最主要的色譜峰，回收溶劑，得到化合物即為偽異沙蟾毒精。

應(yīng)用^[2]

偽異沙蟾毒精可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及體外成環(huán)，抑制體內(nèi)腫瘤微血管的形成，因此可以用于制備抑制血管新生的治療藥物。取狀態(tài)良好、對(duì)數(shù)生長期HUVEC血管內(nèi)皮細(xì)胞(購自中科院細(xì)胞所)按照5×103個(gè)/孔的濃度接種96孔板，置于37℃、含5％CO2的培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞貼壁后，吸掉原培養(yǎng)液，對(duì)照組加入DMEM完全培養(yǎng)基100μl，實(shí)驗(yàn)組分別加入含25、50、125nM劑量的偽異沙蟾毒精(每個(gè)劑量設(shè)3個(gè)復(fù)孔)的DMEM完全培養(yǎng)基，繼續(xù)置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加藥時(shí)間點(diǎn)計(jì)為0h。48h后，按照CCK-8試劑盒使用說明，吸去培養(yǎng)基，各孔加入100μl10％CCK-8培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基90μl+CCK-810μl)，置于37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱孵育1h，用多功能酶標(biāo)儀測450nm處吸光值(A值)計(jì)算細(xì)胞增殖率。與對(duì)照組相比，加入偽異沙蟾毒精后HUVEC細(xì)胞的生長明顯被抑制，而且偽異沙蟾毒精的劑量越高，抑制作用越顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，偽異沙蟾毒精對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖具有劑量依賴的抑制效應(yīng)。

主要參考資料

[1]由沙蟾毒精(arenobufagin)高效合成偽異沙蟾毒精(ψ-bufarenogin)的方法

[2] CN201510191235.8偽異沙蟾毒精在制備抗血管新生藥物中的應(yīng)用