STABLE 感受態(tài)細(xì)胞
| 中文名稱 | STABLE 感受態(tài)細(xì)胞 |
|---|---|
| 中文同義詞 | STABLE 感受態(tài)細(xì)胞 |
| 英文名稱 | Stable Competent Cell |
| 英文同義詞 | Stable Competent Cell |
| CAS號(hào) | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS號(hào) | |
| 相關(guān)類別 | 感受態(tài)細(xì)胞;細(xì)胞 |
| Mol文件 | Mol File |
| 結(jié)構(gòu)式 |
STABLE 感受態(tài)細(xì)胞 性質(zhì)
STABLE感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌Stable菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)高轉(zhuǎn)化效率菌株，是逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株。
Stable菌株是是逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，具有與Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表現(xiàn)出比Stbl2，Stbl3更優(yōu)異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復(fù)序列DNA片段的克隆。2.含有recA1 rel A1突變，可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率。3.含有核酸酶endA1突變，避免提取質(zhì)粒過程中核酸酶的污染，提高了提取病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。4.含有l(wèi)acZΔM15，可用于藍(lán)、白斑篩選。
-70℃保存，避免反復(fù)凍融。不適合在液氮中保存。1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入1-5μl含有1-100ng的質(zhì)粒DNA或5-10μl連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手指撥打管底，輕輕混勻。 2.冰水浴中放置30分鐘，不要晃動(dòng)。 3.42℃熱擊60秒鐘，不要晃動(dòng)。 4.冰水浴中放置2分鐘，不要晃動(dòng)。 5.加入500μl的室溫的SOC或LB培養(yǎng)基。 6.置于37℃搖床中，150-200rpm震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘。 7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-18小時(shí)。 （平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化最好用涂布法。） （質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟2的時(shí)間縮短到5分鐘，對(duì)于氨芐青霉素抗性的質(zhì)粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需60分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）對(duì)氨芐青霉素、氯霉素、卡那霉素、壯觀霉素和呋喃妥因敏感。具有四環(huán)素和鏈霉素抗性。