腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)是在神經生長因子被發(fā)現(xiàn)后約30年由德國神經化學家及其同事首次從豬腦中分離純化得到，并發(fā)現(xiàn)具有防止神經元死亡效能的一種活性多肽，主要在中樞神經系統(tǒng)內合成，是由119個氨基酸殘基組成的小分子堿性蛋白質。BDNF對多種神經元，如運動神經元、神經嵴及基板起源的感覺神經元、黑質的多巴胺神經元、基底前腦的膽堿能神經元以及海馬、皮質、視神經節(jié)等處的神經元的生長、分化及損傷后修復有促進作用。這些作用表明，BDNF具有治療一些中樞神經系統(tǒng)退行性疾病如阿爾茨海默病的潛力。將菌體用PBS緩沖液重復洗2次，按1∶ 10懸浮于5 mmol /L EDTA-50 mmol /L Tri s-HCl ( pH8. 0)緩沖液，冰浴超聲破碎，離心收集包含體沉淀。用低濃度脲重復洗滌2次，洗滌后的包含體溶解于6 mol /L鹽酸胍-50 mmo l /Lβ -巰基乙醇-50 mmo l /L Tris· HCl ( pH8. 0)，1～2 h。再用8 mol /L脲-50mmol /L PB( pH7. 0)透析，以脲替換鹽酸胍，經0. 45 μm微孔濾膜過濾后樣品上樣進行柱色譜。首先，用Wa ters 650 系統(tǒng)和CM-Sepharose FF 柱，收集的rhBDN F峰，用谷胱甘肽系統(tǒng)( 0. 2 mmol /L GSSG-1 mmol /L GSH)復性，復性液中蛋白濃度50～100 μg /ml，pH8. 0，4℃ 12～18 h。復性后樣品再用Waters Delta 4 000高壓色譜和C8 反相柱( 2 cm× 30 cm) ，進樣后，20% 乙腈(含0. 1% TFA)和90% 乙腈(含0. 1% TFA)之間梯度洗脫，流速4 ml /min，收集重組人腦源性神經營養(yǎng)因子峰，凍干。將純化得到的重組人腦源性神經營養(yǎng)因子（rhBDNF）作進一步鑒定，包括Western-blot，N-末端氨基酸序列分析及其生物活性的測定。實驗結果表明，純化所得蛋白和抗-hBDNF多克隆抗體有結合特異性，N-末端有一個大腸桿菌系統(tǒng)表達蛋白常見的甲硫氨酸，第14位Cys 在測定條件下被破壞外，重組人腦源性神經營養(yǎng)因子（rhBDNF）-末端序列完全一致。用雞胚背根神經節(jié)法測定其生物活性表明，活性為50 ng /ml。