精確稱取試樣約1g，用水溶解并定容至100ml，取該液50ml，以此作為試樣液，按OT-15中方法三測(cè)定。LD₅₀ 6.48g/kg(雄小鼠，經(jīng)口)。重組人TNFα對(duì)pH和熱均有一定的耐受性。在pH 6-10，4℃條件下，24h后仍有活性；60℃時(shí)，1h后仍有活性。大腸桿菌生產(chǎn)的TNFβ是非糖基化蛋白，在變性條件下容易凝聚，對(duì)胰蛋白酶、糜蛋白酶等酶類不敏感，對(duì)熱不穩(wěn)定，75℃失活，但其生化特性與天然TNFβ相似。主要用于抗腫瘤和抗病毒綜合征的治療。
不良反應(yīng)：TNFα可能有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛、惡心、嘔吐、食欲不振、全身倦怠、肌肉酸痛等；高劑量可導(dǎo)致休克、腎功能不全、白細(xì)胞及血小板減少和肝功能改變等。食用紅色素。用于櫻桃、魚糕、海帶魚肉卷、香腸、糕餅、魚松等，用量5～100mg/kg。用作吸附指示劑、細(xì)胞染色劑細(xì)菌染色劑；銀量滴定法的吸附指示劑由四氯熒光素碘化后用氯化鈉鹽析而得(參照熒光桃紅)。方法一、重組TNFα的工藝過程
細(xì)菌發(fā)酵 將工程菌接種于LB培養(yǎng)基，37℃震蕩培養(yǎng)至A_600nm=1，轉(zhuǎn)至M9培養(yǎng)基，于42℃誘導(dǎo)4h。離心，收集菌體。用pH為8的磷酸鹽緩沖液(PB，10mmol/L)懸浮菌體，并用超聲破碎菌體，離心收集上清液，對(duì)PB透析，得TNFα粗品。
工程菌[培養(yǎng)、發(fā)酵]→[37℃、42℃]發(fā)酵菌體[10mmol/L PB]→[pH8]TNFα粗品
DEAE-Sepharose FF 離子交換柱層析 離子交換柱用PB平衡，加TNFα粗品，用PB洗柱，再加75 mmol/L NaCl洗脫，收集各峰，測(cè)TNFα活性。
TNFα粗品[DEAE-Sepharose FF離子柱]→[75 mmol/L NaCl]TNFα活性組分I
Q-Sepharose FF離子交換柱層析 離子交換柱用pH 8、20 mmol/LTris-HCl緩沖液平衡，然后加TNFα活性組分I，用80 mmol/L NaCl洗脫，收集各峰，測(cè)TNFα活性，得TNFα活性組分II。
TNFα活性組分I[Q-Sepharose FF離子柱]→[80 mmol/L NaCl]TNFα活性組分II
CM-Sepharose FF離子交換柱層析 離子交換柱用pH為6的10mmol/L PB平衡，加TNFα活性組分II，再依次用該P(yáng)B液、PB液加200mmol/L NaCl及PB液加600 mmol/L NaCl分步洗脫，收集各洗脫液，測(cè)TNFα活性，即得TNFα純品(在4℃時(shí)，通過三次常壓離子交換，電泳表明：PB液加600 mmol/L NaCl的洗脫峰為TNFα單一條帶，可得TNFα純品)。
TNFα活性組分II[CM-Sepharose FF離子柱]→[PB、200及600mmol/L NaCl]TNFα純品
方法二、對(duì)合成的TNFα突變改造
突變改造 用多位點(diǎn)突變引物和PCR方法對(duì)合成的TNFα基因突變改造，使其第二位精氨酸密碼子CGT變?yōu)橘嚢彼崦艽a子AAA，即得突變基因TNF-K2。
TNFα基因[多位點(diǎn)突變引物、PCR方法]→TNF-K2
轉(zhuǎn)化、重組 將TNF-K2插入載體pSB-92的P_L啟動(dòng)子下游，轉(zhuǎn)化E．coliJM103，經(jīng)酶切鑒定篩選轉(zhuǎn)化子，得重組質(zhì)粒pSB-TNF-K2。TNF-K2[pSB-92]→pSB-TNF-K2
培養(yǎng)、誘導(dǎo) 將pSB-TNF-K2于30℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，于42℃誘導(dǎo)4h，即得突變體[Lys²]TNFα，其分子量為17kD，比活性為6.8×10⁷U/mg 蛋白，是一種可溶性蛋白質(zhì)。
pSB-TNF-K2[30℃, 42℃, 4h]→[Lys²]TNFα.