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B細(xì)胞磁珠分選標(biāo)準(zhǔn)workflow

發(fā)布日期:2026/6/18 11:29:43發(fā)布人：上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司閱讀量：30

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備-全套試劑耗材

磁珠分選-所用全套試劑耗材

無(wú)柱式磁珠分選技術(shù)全流程

二、磁珠分選步驟參考（以S0K3007為例）

實(shí)驗(yàn)思路框架

▼

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樣本來(lái)源

C57?Mouse

取材

Spleen

樣本處理

通過(guò)研磨加裂紅方式處理為單細(xì)胞懸液

分選目的細(xì)胞

CD19 ?B細(xì)胞

1、樣本制備

提前制備完成單細(xì)胞懸液，具體步驟可參考“學(xué)術(shù)中心-單細(xì)胞樣本制備解決方案-Single-cell suspensions from Mouse splee

（https://www.univ-bio.com/study-center/solution/Technology/SCS/587.html）

2、細(xì)胞計(jì)數(shù)&活率測(cè)定

取10-20μL細(xì)胞懸液，與等體積的臺(tái)盼藍(lán)染液（4%）混合

取適量混合液（通常10μL）加入計(jì)數(shù)儀專用的一次性計(jì)數(shù)載玻片

將載玻片插入儀器，自動(dòng)分析細(xì)胞總濃度（cells/mL）、活細(xì)胞濃度和活率百分比

3、磁性標(biāo)記

細(xì)胞重懸：用 100 μL MagSep Separation Buffer 重懸 1×10?細(xì)胞，試劑可根據(jù)樣品體積等比例調(diào)整，建議留存分選前樣本檢測(cè)初始Mouse B比例；

加入抗體：加入 10 μL Mouse Pan B cell Biotin Antibody Cocktail 至樣品中，輕輕混勻，可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

抗體孵育：將抗體與細(xì)胞充分結(jié)合，室溫孵育 10 min。

混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

4、磁性分離

(5) 混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

(6) 加入磁珠：向樣品中加入 10 μL Streptavidin beads（每 100 μL 體系）。

(7) 磁珠孵育：輕柔混勻磁珠和細(xì)胞，室溫孵育 5 min；孵育過(guò)程中磁珠可能沉底，可在 2.5 min 時(shí)輕彈管壁混勻一次，混勻可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

(8) 加緩沖液上磁極：加入 MagSep Separation Buffer，將總體積加至 2.5 mL（5 mL 流式管）或 7.5 mL（15 mL 離心管），立即放置在磁極上，防止磁珠大量沉底。

(9) 磁力吸附：將樣品置于磁極上，使磁珠吸附在管壁上；單孔磁力架吸附 3 min，聯(lián)排磁力架吸附 5 min。

(10) 收集目標(biāo)細(xì)胞：傾斜磁力架，將樣品倒入新的收集管中，收集未被磁珠標(biāo)記的細(xì)胞；分選后的細(xì)胞可采用 400 g 離心 7 min，用于后續(xù)培養(yǎng)和分析。

三、流式驗(yàn)證：分選效果金標(biāo)準(zhǔn)

取適量細(xì)胞用熒光抗體染色，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選純度，這是驗(yàn)證分選效果的金標(biāo)準(zhǔn)。

流式結(jié)果S0K3007 Mouse pan B Cell Isolation Kit (Column-Free)

分選前 ??????????????Starter ??????????????進(jìn)口品牌

四、小優(yōu)有妙計(jì)--新手避坑核心要點(diǎn)

1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推薦使用5 mL單孔磁極(Starter EasyIso Separator)吸附總體積為2.5mL；2-5 ×108 cells（2-5mL）推薦使用15 mL聯(lián)排磁極(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附總體積為7.5mL；

若樣本活率偏低，建議使用去死細(xì)胞試劑盒去除死細(xì)胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;

實(shí)驗(yàn)所用試劑耗材

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產(chǎn)品分類

產(chǎn)品編號(hào)

名稱

規(guī)格

CD19無(wú)柱式分選磁珠

S0K3007

Mouse Pan B Cell Isolation Kit (Column-Free)

100T

環(huán)形磁鐵

S0D3022

Starter EasyIso Separator

盒

分選Buffer

S0D3018

Starter MagSep Separation Buffer

250ml

篩網(wǎng)

abs7231

40um細(xì)胞篩網(wǎng)（300目，藍(lán)色，底面過(guò)濾）

50個(gè)/箱

紅細(xì)胞裂解液（1×）

abs9101

RBC Lysis Buffer

100ml

阻斷FCR非特異性染色

S0B0599

Mouse FcR Blocking Reagent

200T

染色緩沖液

abs9475

Flow cytometry staining buffer

500ml

流式鑒定

S0B5445

Alexa Fluor 647 Rat Anti-Mouse CD19 Antibody (1D3)

100T

流式鑒定

S0B8364

Alexa Fluor488 Armenian hamster Anti-Mouse CD3 Antibody (S-R491)

100T

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B細(xì)胞磁珠分選標(biāo)準(zhǔn)workflow

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備-全套試劑耗材

磁珠分選-所用全套試劑耗材

無(wú)柱式磁珠分選技術(shù)全流程

二、磁珠分選步驟參考（以S0K3007為例）

實(shí)驗(yàn)思路框架

1、樣本制備

提前制備完成單細(xì)胞懸液，具體步驟可參考“學(xué)術(shù)中心-單細(xì)胞樣本制備解決方案-Single-cell suspensions from Mouse splee

（https://www.univ-bio.com/study-center/solution/Technology/SCS/587.html）

2、細(xì)胞計(jì)數(shù)&活率測(cè)定

取10-20μL細(xì)胞懸液，與等體積的 臺(tái)盼藍(lán)染液（4%） 混合

取適量混合液（通常10μL）加入計(jì)數(shù)儀專用的一次性計(jì)數(shù)載玻片

將載玻片插入儀器，自動(dòng)分析細(xì)胞總濃度（cells/mL）、活細(xì)胞濃度和活率百分比

3、磁性標(biāo)記

細(xì)胞重懸：用 100 μL MagSep Separation Buffer 重懸 1×10?細(xì)胞，試劑可根據(jù)樣品體積等比例調(diào)整，建議留存分選前樣本檢測(cè)初始Mouse B比例；

加入抗體：加入 10 μL Mouse Pan B cell Biotin Antibody Cocktail 至樣品中，輕輕混勻，可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

抗體孵育：將抗體與細(xì)胞充分結(jié)合，室溫孵育 10 min。

混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

4、磁性分離

(5) 混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

(6) 加入磁珠：向樣品中加入 10 μL Streptavidin beads（每 100 μL 體系）。

(7) 磁珠孵育：輕柔混勻磁珠和細(xì)胞，室溫孵育 5 min；孵育過(guò)程中磁珠可能沉底，可在 2.5 min 時(shí)輕彈管壁混勻一次，混勻可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

(8) 加緩沖液上磁極：加入 MagSep Separation Buffer，將總體積加至 2.5 mL（5 mL 流式管）或 7.5 mL（15 mL 離心管），立即放置在磁極上，防止磁珠大量沉底。

(9) 磁力吸附：將樣品置于磁極上，使磁珠吸附在管壁上；單孔磁力架吸附 3 min，聯(lián)排磁力架吸附 5 min。

(10) 收集目標(biāo)細(xì)胞：傾斜磁力架，將樣品倒入新的收集管中，收集未被磁珠標(biāo)記的細(xì)胞；分選后的細(xì)胞可采用 400 g 離心 7 min，用于后續(xù)培養(yǎng)和分析。

三、流式驗(yàn)證：分選效果金標(biāo)準(zhǔn)

取適量細(xì)胞用熒光抗體染色，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選純度，這是驗(yàn)證分選效果的金標(biāo)準(zhǔn)。

流式結(jié)果S0K3007 Mouse pan B Cell Isolation Kit (Column-Free)

分選前 ??????????????Starter ??????????????進(jìn)口品牌

四、小優(yōu)有妙計(jì)--新手避坑核心要點(diǎn)

1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推薦使用5 mL單孔磁極(Starter EasyIso Separator)吸附總體積為2.5mL；2-5 ×108 cells（2-5mL）推薦使用15 mL聯(lián)排磁極(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附總體積為7.5mL；

若樣本活率偏低，建議使用去死細(xì)胞試劑盒去除死細(xì)胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;

實(shí)驗(yàn)所用試劑耗材

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備-全套試劑耗材

二、磁珠分選步驟參考（以S0K3007為例）

1、樣本制備

提前制備完成單細(xì)胞懸液，具體步驟可參考“學(xué)術(shù)中心-單細(xì)胞樣本制備解決方案-Single-cell suspensions from Mouse splee

取10-20μL細(xì)胞懸液，與等體積的臺(tái)盼藍(lán)染液（4%）混合

將載玻片插入儀器，自動(dòng)分析細(xì)胞總濃度（cells/mL）、活細(xì)胞濃度和活率百分比

3、磁性標(biāo)記

細(xì)胞重懸：用 100 μL MagSep Separation Buffer 重懸 1×10?細(xì)胞，試劑可根據(jù)樣品體積等比例調(diào)整，建議留存分選前樣本檢測(cè)初始Mouse B比例；

加入抗體：加入 10 μL Mouse Pan B cell Biotin Antibody Cocktail 至樣品中，輕輕混勻，可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

抗體孵育：將抗體與細(xì)胞充分結(jié)合，室溫孵育 10 min。

混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

4、磁性分離

(5) 混勻磁珠：震蕩 5-30 s，充分混勻 Streptavidin beads。

(6) 加入磁珠：向樣品中加入 10 μL Streptavidin beads（每 100 μL 體系）。

(7) 磁珠孵育：輕柔混勻磁珠和細(xì)胞，室溫孵育 5 min；孵育過(guò)程中磁珠可能沉底，可在 2.5 min 時(shí)輕彈管壁混勻一次，混勻可采用移液器輕輕吹勻 2-3 次。

(8) 加緩沖液上磁極：加入 MagSep Separation Buffer，將總體積加至 2.5 mL（5 mL 流式管）或 7.5 mL（15 mL 離心管），立即放置在磁極上，防止磁珠大量沉底。

(9) 磁力吸附：將樣品置于磁極上，使磁珠吸附在管壁上；單孔磁力架吸附 3 min，聯(lián)排磁力架吸附 5 min。

(10) 收集目標(biāo)細(xì)胞：傾斜磁力架，將樣品倒入新的收集管中，收集未被磁珠標(biāo)記的細(xì)胞；分選后的細(xì)胞可采用 400 g 離心 7 min，用于后續(xù)培養(yǎng)和分析。

三、流式驗(yàn)證：分選效果金標(biāo)準(zhǔn)

取適量細(xì)胞用熒光抗體染色，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選純度，這是驗(yàn)證分選效果的金標(biāo)準(zhǔn)。

四、小優(yōu)有妙計(jì)--新手避坑核心要點(diǎn)

1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推薦使用5 mL單孔磁極(Starter EasyIso Separator)吸附總體積為2.5mL；2-5 ×108 cells（2-5mL）推薦使用15 mL聯(lián)排磁極(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附總體積為7.5mL；

若樣本活率偏低，建議使用去死細(xì)胞試劑盒去除死細(xì)胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）;