牡荊素葡萄糖苷是天然黃酮糖苷小分子,CY5.5 長波長熒光基團共價修飾得到 Glucosylvitexin-CY5.5,完整保留糖苷分子天然結(jié)構(gòu),依托遠紅外熒光低背景優(yōu)勢,開展天然小分子細胞轉(zhuǎn)運、分子互作基礎(chǔ)科研。
未標記天然糖苷無法可視化觀測胞內(nèi)分布,小分子進入細胞后轉(zhuǎn)運、富集過程僅能依靠裂解后定量檢測,無法獲取空間定位信息,難以判斷糖苷作用的胞內(nèi)區(qū)域。Glucosylvitexin-CY5.5 熒光發(fā)射波段處于遠紅外區(qū)間,細胞自身蛋白、核酸自發(fā)熒光幾乎無干擾,共聚焦熒光成像可清晰捕捉糖苷分子在細胞膜、胞質(zhì)、細胞器分布信號,直觀呈現(xiàn)小分子胞內(nèi)動態(tài)變化。
CY5.5 熒光基團水溶性良好,偶聯(lián)產(chǎn)物在細胞培養(yǎng)液、生理緩沖液中均勻溶解,無疏水沉淀析出,可穩(wěn)定與細胞共孵育,完整還原天然牡荊素葡萄糖苷細胞攝取行為,避免因分子析出導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
天然糖苷胞內(nèi)靶標分子篩選實驗適配該試劑。將 Glucosylvitexin-CY5.5 與細胞裂解液共孵育,依靠 CY5.5 專屬熒光通道定位與糖苷結(jié)合的蛋白復(fù)合物,結(jié)合共定位檢測手段篩選細胞內(nèi)互作靶分子,梳理天然黃酮糖苷調(diào)控細胞基礎(chǔ)生理活動的分子通路。
多熒光通道同步觀測實驗可搭配其他波段標記試劑聯(lián)用,CY5.5 熒光通道獨立無光譜重疊,可同步觀測糖苷分子與胞內(nèi)標志性蛋白、細胞器探針熒光信號,判斷糖苷分子與各類胞內(nèi)結(jié)構(gòu)共定位情況,解析糖苷胞內(nèi)轉(zhuǎn)運完整路徑。
分子偶聯(lián)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,糖苷骨架未發(fā)生改性破壞,熒光連接鍵生理環(huán)境下不易水解解離,適配細胞孵育、熒光成像、分子互作篩選多類體外基礎(chǔ)實驗。 本文僅科普 CY5.5 標記牡荊素葡萄糖苷熒光科研試劑基礎(chǔ)應(yīng)用方向,僅用于體外天然小分子細胞交互機理研究,不作為標準化糖苷分子定量檢測方案。
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