增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）作為DNA復(fù)制與修復(fù)的核心支架蛋白，長(zhǎng)期以來(lái)被視為抗腫瘤研究的重要靶點(diǎn)。然而，傳統(tǒng)PCNA配體難以區(qū)分正常細(xì)胞與快速增殖細(xì)胞中的PCNA異構(gòu)體，選擇性始終是短板。2023年，City of Hope團(tuán)隊(duì)在Cell Chemical Biology發(fā)表了一項(xiàng)里程碑式成果——通過(guò)理性藥物設(shè)計(jì)策略，篩選出小分子AOH1996，可選擇性作用于癌性PCNA、誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄-復(fù)制沖突（TRC）從而導(dǎo)致增殖細(xì)胞選擇性凋亡。這一發(fā)現(xiàn)迅速引發(fā)學(xué)術(shù)界廣泛關(guān)注。對(duì)于從事PCNA功能研究或TRC機(jī)制探索的課題組而言，獲取高純度、圖譜齊全的工具化合物是實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性的基石。目前國(guó)內(nèi)如瀚香生物（BiochemPartner）等平臺(tái)已實(shí)現(xiàn)AOH1996的現(xiàn)貨供應(yīng)（貨號(hào)BCP49555，CAS：2089314-64-5，純度≥98%），為相關(guān)基礎(chǔ)研究提供便利。
三、研究前沿進(jìn)展
自2023年首篇Cell Chemical Biology論文發(fā)表以來(lái)，圍繞AOH1996的機(jī)制研究與適應(yīng)癥探索持續(xù)拓展。
（1）首篇機(jī)制論文（2023年）
Gu L、Li M、Li CM等人在Cell Chemical Biology上完整闡述了AOH1996的發(fā)現(xiàn)過(guò)程和分子機(jī)制。研究在70多種細(xì)胞系中驗(yàn)證了該分子的生長(zhǎng)抑制活性，并在異種移植模型中觀察到顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制，同時(shí)未記錄到明顯的體重下降或血液學(xué)毒性信號(hào)。該研究將轉(zhuǎn)錄-復(fù)制沖突這一基礎(chǔ)生物學(xué)概念推至轉(zhuǎn)化研究的前沿。
（2）AML線粒體動(dòng)力學(xué)研究（2024年）
Kang H、Valerio M、Feng J等人發(fā)表于Experimental Hematology & Oncology的研究揭示了AOH1996在急性髓系白血?。ˋML）中的新機(jī)制——胞質(zhì)PCNA的線粒體定位調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，AML細(xì)胞中胞質(zhì)PCNA高表達(dá)并定位于線粒體，支持氧化磷酸化代謝；AOH1996通過(guò)抑制線粒體PCNA功能，擾亂線粒體動(dòng)力學(xué)，導(dǎo)致AML干細(xì)胞代謝崩潰。該發(fā)現(xiàn)將AOH1996的作用機(jī)制從核內(nèi)TRC擴(kuò)展至胞質(zhì)線粒體層面，為AMS的實(shí)驗(yàn)室研究提供了新視角。
（3）非小細(xì)胞肺癌研究（2026年）
Arafat K、Al-Azawi AM等人近期在Frontiers in Pharmacology發(fā)表了AOH1996在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）模型中的最新數(shù)據(jù)。研究顯示AOH1996能夠降低NSCLC細(xì)胞的遷移和侵襲能力，同時(shí)下調(diào)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)。該工作進(jìn)一步拓展了AOH1996的生物學(xué)功能譜，提示其在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性調(diào)控方面的潛在作用。
此外，AOH1996已進(jìn)入臨床探索階段（NCT06763341），針對(duì)復(fù)發(fā)性/難治性AML的I期研究正在招募中，主要評(píng)估安全性、耐受性及初步的藥代動(dòng)力學(xué)特征。
四、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用要點(diǎn)與試劑選擇
對(duì)于計(jì)劃在實(shí)驗(yàn)中使用AOH1996的研究人員，以下操作建議可供參考：
溶解與保存：AOH1996在DMSO中具有良好溶解性（建議配制成10-50 mM儲(chǔ)備液），水溶性較差。儲(chǔ)備液應(yīng)分裝后于-20°C避光保存，避免反復(fù)凍融。工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
工作濃度：文獻(xiàn)報(bào)道的體外實(shí)驗(yàn)中，AOH1996的常用工作濃度范圍在0.1-10 μM之間，具體取決于細(xì)胞系類型和實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。建議先通過(guò)MTS/CCK-8法測(cè)定待測(cè)細(xì)胞系的IC??值，再確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。
對(duì)照設(shè)置：鑒于AOH1996的選擇性依賴于caPCNA表達(dá)水平，建議同時(shí)設(shè)置正常細(xì)胞系對(duì)照（如WI-38、HUVEC等），以驗(yàn)證選擇性。對(duì)于機(jī)制研究，可考慮設(shè)置WST-1或BrdU摻入實(shí)驗(yàn)來(lái)區(qū)分生長(zhǎng)抑制與細(xì)胞周期效應(yīng)。
關(guān)鍵檢測(cè)指標(biāo)：TRC研究中可關(guān)注γH2AX（DNA損傷標(biāo)志物）、RPB1蛋白水平（Western blot）、R-loop形成（DRIP-seq或S9.6抗體免疫熒光）以及復(fù)制叉速率（DNA fiber assay）。
試劑選擇考量：工具化合物的純度直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。建議選用附帶NMR、LC-MS、HPLC三重檢測(cè)圖譜的產(chǎn)品，以確?；衔锷矸轀?zhǔn)確和純度可控。目前瀚香生物（貨號(hào)BCP49555，CAS：2089314-64-5，純度≥98%）可提供AOH1996的全套質(zhì)檢圖譜，支持毫克至克級(jí)規(guī)格，滿足從初篩到驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的不同用量需求。
結(jié)語(yǔ)
AOH1996作為caPCNA特異性靶向的化學(xué)探針，從分子設(shè)計(jì)到機(jī)制驗(yàn)證完成了一條清晰的科學(xué)邏輯鏈——結(jié)構(gòu)差異驅(qū)動(dòng)的選擇性 → TRC增強(qiáng) → RPB1降解 → 選擇性細(xì)胞凋亡。從2023年的首篇機(jī)制論文到2024年線粒體新機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，再到2026年NSCLC研究的拓展，圍繞這一分子的研究生態(tài)仍在持續(xù)生長(zhǎng)。對(duì)于關(guān)注DNA復(fù)制應(yīng)激、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和基因組穩(wěn)定性研究的課題組，AOH1996提供了一個(gè)兼具高選擇性和機(jī)制清晰度的研究工具。有相關(guān)研究需求的科研人員可進(jìn)一步做技術(shù)評(píng)估，瀚香生物等平臺(tái)亦可為實(shí)驗(yàn)推進(jìn)提供穩(wěn)定的化合物供應(yīng)保障。
參考文獻(xiàn)
Gu L, Li M, Li CM, et al. Small molecule targeting of transcription-replication conflict for selective chemotherapy[J]. Cell Chemical Biology, 2023, 30(10): 1235-1247.e6. DOI: 10.1016/j.chembiol.2023.07.001
Kang H, Valerio M, Feng J, et al. AOH1996 targets mitochondrial dynamics and metabolism in leukemic stem cells via mitochondrial PCNA inhibition[J]. Experimental Hematology & Oncology, 2024, 13: 123. DOI: 10.1186/s40164-024-00586-4
Arafat K, Al-Azawi AM, Sulaiman S, et al. The PCNA inhibitor AOH1996 impairs tumor growth and invasiveness in non-small cell lung cancer[J]. Frontiers in Pharmacology, 2026. DOI: 10.3389/fphar.2026.1802179