玉米赤霉烯酮快速檢測(cè)試劑盒說明書

(貨號(hào)：Ounuo98003)

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物玉米赤霉烯酮將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物玉米赤霉烯酮的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物玉米赤霉烯酮的含量。

二、試劑盒特性

1. 靈 敏 度：   0.1ppb

2. 孵育溫度：   25℃

3. 孵育時(shí)間：   30min～15min

4. 樣本檢測(cè)下限

飼   料    10ppb

大米、玉米、花生    5ppb

5. 交叉反應(yīng)率

玉米赤霉烯酮  99%

6. 樣本回收率

飼料、大米、玉米、花生 100±30%
三、樣品處理

（a）飼料樣本處理方法：

1. 取1.0±0.05g研碎的樣本于50ml離心管中；加入5ml樣本提取液；

2. 充分振蕩3min（或手搖5min以上），20℃ 4000r/min以上離心10min；

3. 取上清50μl，加入950μl樣本復(fù)溶液，充分振蕩混勻；

4. 取50μl用于分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：100倍  

注：若測(cè)出樣本中待測(cè)物含量已超出曲線范圍，可把樣本再做多倍稀釋后進(jìn)行檢測(cè)（例如：取50μl上清液于新的離心管中，加入1450μl去離子水，稀釋倍數(shù)150倍）。

（b）玉米、大米樣本處理方法：

5. 取1.0±0.05g研碎的樣本于50ml離心管中；加入5ml樣本提取液；

6. 充分振蕩3min（或手搖5min以上），20℃ 4000r/min以上離心10min；

7. 取上清100μl，加入900μl樣本復(fù)溶液，充分振蕩混勻；

8. 取50μl用于分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：50倍  

注：若測(cè)出樣本中待測(cè)物含量已超出曲線范圍，可把樣本再做多倍稀釋后進(jìn)行檢測(cè)（例如：取50μl上清液于新的離心管中，加入950μl樣本復(fù)溶液，稀釋倍數(shù)100倍）。

（c）花生樣本處理方法：

1. 取1.0±0.05g研碎的花生樣本于50ml離心管中；加入5ml樣本提取液，再加入4ml正己烷；

2. 充分振蕩3min（或手搖5min以上），20℃ 4000r/min以上離心10min；

3. 去掉上清，取中間層液體100μl，加入900μl樣本復(fù)溶液，充分振蕩混勻；

4. 取50μl用于分析。

  樣本稀釋倍數(shù)：50倍   

注：若測(cè)出樣本中待測(cè)物含量已超出曲線范圍，可把樣本再做多倍稀釋后進(jìn)行檢測(cè)（例如：取50μl中間層液體于新的離心管中，加入950μl樣本復(fù)溶液，稀釋倍數(shù)100倍）。

四、 酶標(biāo)免疫分析程序:

1、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。

6、 將孔內(nèi)液體甩干，用稀釋后的洗滌液250μl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

7、 顯色：加入底物A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、 測(cè)定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，5min內(nèi)讀數(shù)），測(cè)定每孔OD值。