線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）試劑盒說明書

                                                  分光光度法 50管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質(zhì)和線粒體中。

測定原理：

催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿和蒸餾水。

樣本測定的準備：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2 將勻漿液于600g，4℃離心5min。

3 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的MDH（此步可選做）。

5 在步驟④中的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體MDH測定。

詳細說明書聯(lián)系客服。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！