檢測原理
RNA提?。簭臉颖荆ㄑ适米?、肺泡灌洗液等）中純化病毒RNA。
RT-PCR擴增：
逆轉錄 (RT)：將病毒RNA逆轉錄為cDNA。
熒光定量PCR：使用特異性引物探針組合靶向HPIV-4B保守區(qū)域（如L基因或HN基因），SYBR Green染料結合雙鏈DNA發(fā)出熒光信號，實時監(jiān)測擴增曲線。
結果判讀：根據(jù)Ct值（循環(huán)閾值）和熔解曲線（Tm值）定性檢測病毒核酸。
產(chǎn)品名稱 | 人副流感病毒4B型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Human Parainfluenza Virus 4B (HPIV-4B) Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3287 |
試劑盒組成
| 組分 | 體積/規(guī)格 | 主要成分 |
| HPIV-4B RT-PCR反應液 | 600 μL/tube | SYBR Green熒光染料、dNTPs、緩沖液 |
| RT-PCR酶混合液 | 100 μL/tube | 逆轉錄酶、Taq DNA聚合酶、RNase抑制劑 |
| HPIV-4B陽性對照 | 50 μL/tube | HPIV-4B假病毒RNA |
| 陰性對照 | 50 μL/tube | DEPC水或RNase-free水 |
| RNase-Free水 | 1 mL/tube | 無核酸酶水 |
樣本要求
樣本類型：鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液（BALF）。
保存與運輸：2~8℃保存≤72小時，長期存儲需-80℃冷凍。
RNA提?。和扑]使用商品化RNA提取試劑盒（如QIAamp Viral RNA Kit）。
操作步驟
RNA提?。ò刺崛≡噭┖姓f明書操作）→ 獲得RNA模板。
反應體系配制（冰上操作）：
| 組分 | 體積（μL） |
| RT-PCR反應液 | 15 |
| 酶混合液 | 2 |
| RNA模板/對照 | 3 |
| 總體積 | 20 |
PCR程序設置：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 逆轉錄 | 50℃ | 15 min | 1 |
| 預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| PCR擴增 | 95℃ | 10 sec | 40 |
| | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲線分析 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升/5 sec | 1 |
結果判讀
陽性：
Ct值 ≤ 35.0，且熔解曲線Tm值符合HPIV-4B標準峰（如：85±1℃）。
可疑：
Ct值 35.1~38.0，需復測確認。
陰性：
無Ct值或Ct值≥38.0，熔解曲線無特異性峰。
注：陰性對照（Ct=無）、陽性對照（Ct≤30）有效時結果成立。
性能參數(shù)
靈敏度：檢出限（LOD）≤ 50 copies/mL。
特異性：不與HPIV-1/2/3、流感病毒、RSV、腺病毒等交叉反應。
重復性：CV值 ≤ 5%。
注意事項
嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴增區(qū)），避免污染。
穿戴防護裝備（手套、口罩），廢棄組分按生物危害物處理。
試劑使用前充分混勻，避免反復凍融。
本試劑盒僅用于科研，不適用于臨床診斷。
儲存與有效期
儲存條件：-20℃避光保存（避免反復凍融＞3次）。
有效期：12個月。
公司正在出售的產(chǎn)品
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關鍵字： 人副流感病毒4B型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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