檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于染料法熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對綿羊副流感病毒3型基因組保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)對病毒核酸的定性或定量檢測。
產(chǎn)品名稱 | 綿羊副流感病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Ovine Parainfluenza Virus Type 3 Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4446 |
主要組分
| 編號 | 成分 | 規(guī)格 |
| 試劑一 | OPIV3擴(kuò)增預(yù)混液（含酶、dNTPs等） | 50μL×1管 |
| 試劑二 | OPIV3熒光反應(yīng)液（含SYBR Green染料） | 950μL×1管 |
| 試劑三 | OPIV3陽性質(zhì)控品（1×10^4 copies/μL） | 50μL×1管 |
| 試劑四 | OPIV3陰性質(zhì)控品（無核酸水） | 50μL×1管 |
| —— | 說明書 | 1份 |
注：
不同批號組分不可混用，避免反復(fù)凍融（≤5次）。
需自備器材：無核酸酶離心管、濾芯吸頭（10/200/1000μL）、離心機(jī)、移液器等。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-15℃以下避光保存，有效期12個(gè)月。
運(yùn)輸要求：泡沫盒加冰袋密封運(yùn)輸，溫度≤8℃。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀（如ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等）。
操作步驟
樣本處理
采集組織、血液或病毒樣本（1g），避免交叉污染。
短期保存于-20℃，長期需-70℃（≤6個(gè)月）。
核酸提取
使用配套或等效DNA/RNA提取試劑，提取后立即檢測或-20℃暫存。
試劑配制與加樣
反應(yīng)液避光解凍，短暫離心混勻。
按比例配制反應(yīng)體系（詳見說明書附表），避免氣泡。
PCR擴(kuò)增
程序設(shè)置：逆轉(zhuǎn)錄（50℃ 15min）→預(yù)變性（95℃ 5min）→40循環(huán)（95℃ 10s→60℃ 30s，熒光采集）。
結(jié)果分析
定量檢測需以陽性質(zhì)控品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（Ct值-log濃度），推算待測樣本濃度。
注意事項(xiàng)
嚴(yán)格分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增區(qū)），穿戴專用防護(hù)用具。
實(shí)驗(yàn)后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒臺(tái)面及器材。
陰性/陽性對照需同步檢測，確保結(jié)果有效性。
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關(guān)鍵字： 綿羊副流感病毒3型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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