防已探針法PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 防已探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Radix Stephaniae Tetrandrae Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5128 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高特異性：
采用防己特異性引物及探針，靶向保守基因序列，無交叉反應(yīng)。
探針法熒光定量技術(shù)，靈敏度達(dá)1000拷貝/反應(yīng)，可檢測(cè)微量模板。
操作便捷：
預(yù)混試劑含Taq酶、dNTPs、緩沖液等，用戶僅需加入模板DNA和引物。
支持一管式擴(kuò)增（RT-PCR可選），減少操作污染風(fēng)險(xiǎn)。
質(zhì)控完善：
提供陽(yáng)性質(zhì)控品（Ct≤35）和陰性質(zhì)控品（Ct=40或無Ct），確保實(shí)驗(yàn)有效性。
適用范圍：
適用于中藥材、提取物或臨床樣本中防己成分的定性鑒定（科研用途）。
試劑盒組分
| 成分 | 規(guī)格（50次反應(yīng)） | 功能說明 |
| PCR預(yù)混液（2×） | 1 mL | 含Taq酶、dNTPs、Mg2?等 |
| 防己特異性引物探針 | 100 μL | 凍干粉或液體形式 |
| 陽(yáng)性質(zhì)控DNA | 50 μL（1×10?拷貝/μL） | 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有效性 |
| 核酸釋放劑（選配） | 20次試用裝 | 輔助樣本前處理 |
| 超純水 | 1 mL | 稀釋或陰性對(duì)照 |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣本前處理
DNA提取：
使用商品化核酸提取試劑盒或試劑盒配套釋放劑，按標(biāo)準(zhǔn)流程提取樣本DNA。
建議設(shè)置提取陰/陽(yáng)性質(zhì)控（如：陽(yáng)性對(duì)照稀釋液+水）。
2. PCR反應(yīng)體系（20-25 μL/反應(yīng)）
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× PCR預(yù)混液 | 10 |
| 引物探針混合液 | 1 |
| 模板DNA | 2-5 |
| 超純水 | 補(bǔ)足至20 |
3. 擴(kuò)增程序（以ABI 7500為例）
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15 sec | 35 |
| 退火/延伸 | 57-60℃ | 15 sec | |
| 熒光采集 | 60℃ | 40 sec | |
4. 結(jié)果分析
閾值設(shè)定：以陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線高點(diǎn)為基準(zhǔn)。
判讀標(biāo)準(zhǔn)：
陽(yáng)性：Ct＜38，明顯指數(shù)擴(kuò)增。
可疑：38≤Ct＜40，需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
陰性：Ct≥40或無擴(kuò)增曲線。
注意事項(xiàng)
防污染措施：
分設(shè)試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)及擴(kuò)增區(qū)，使用帶濾芯吸頭。
實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%乙醇清潔臺(tái)面。
重復(fù)凍融：預(yù)混液解凍后需短暫離心，避免反復(fù)凍融（≤3次）。
無效實(shí)驗(yàn)處理：若陰性質(zhì)控出現(xiàn)擴(kuò)增或陽(yáng)性對(duì)照無信號(hào)，需排查污染或試劑失效。
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關(guān)鍵字： 防已;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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