防風(fēng)探針法PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 防風(fēng)探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Radix Saposhnikoviae Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5129 |
技術(shù)原理
基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用TaqMan探針法：
探針設(shè)計：5'端標(biāo)記熒光報告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，探針與靶序列結(jié)合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：通過監(jiān)測擴(kuò)增過程中熒光強(qiáng)度的實時變化（Ct值），計算起始模板濃度。
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化引物與探針，檢測限低至10拷貝/μL。
高特異性：靶向防風(fēng)保守序列，無交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液與酶體系，簡化操作流程。
內(nèi)控設(shè)計：提供陽性對照（1×10^8拷貝/μL）和陰性對照，確保結(jié)果可靠性。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500 μL | 反應(yīng)體系基礎(chǔ)液 |
| 酶混合液 | 100 μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶 |
| 熒光PCR稀釋液 | 1 mL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 |
| 引物混合液 | 100 μL | 特異性擴(kuò)增防風(fēng)序列 |
| 探針 | 50 μL | 熒光信號生成 |
| 陽性對照 | 50 μL | 1×10^8拷貝/μL |
| 說明書 | 1份 | 操作指南 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽性對照按10倍梯度稀釋（10^7–10^2拷貝/μL），用于定量分析。
2. RNA提取
自備樣品RNA，推薦使用柱式提取法，并設(shè)置制備對照（PC/NC）。
3. qRT-PCR反應(yīng)（20 μL體系）
按比例加入緩沖液、酶、引物、探針及模板RNA，程序如下：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min
預(yù)變性：94℃ 10 min
擴(kuò)增（40循環(huán)）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號）
4. 數(shù)據(jù)分析
定量：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算樣本濃度。
定性：Ct≤36為陽性，≥40為陰性，36–40需復(fù)測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免污染。
質(zhì)量控制：每次實驗需包含陰/陽性對照。
探針避光：防止熒光淬滅。
廢棄物處理：實驗后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒臺面及器材。
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關(guān)鍵字： 防風(fēng);探針法;PCR鑒定試劑盒;
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