廣防己探針法PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 廣防己探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Radix Aristolochiae Fangchi Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5108 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR技術(shù)，專用于廣防己（Radix aristolochiae fangchi）的特異性核酸鑒定，適用于科研領(lǐng)域（不可用于臨床）。通過優(yōu)化設(shè)計的引物與探針，結(jié)合Taq酶的5'核酸外切酶活性，實現(xiàn)高靈敏度和高特異性的檢測，可同時完成定性與定量分析。
檢測原理
探針法基于實時熒光定量PCR技術(shù)：
探針設(shè)計：5'端標(biāo)記熒光報告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，探針與靶序列結(jié)合后，Taq酶切割探針釋放熒光信號。
信號檢測：通過監(jiān)測擴(kuò)增過程中熒光強(qiáng)度的增長，實現(xiàn)對起始模板的定量（Ct值）與定性分析。
產(chǎn)品特點
高靈敏度：檢測限低至1×10^2拷貝/μL。
高特異性：引物針對廣防己保守序列設(shè)計，避免交叉反應(yīng)。
便捷性：即開即用，兼容常規(guī)RNA/DNA提取方法。
質(zhì)控完善：含陽性對照（無傳染性DNA片段）及陰性對照。
試劑盒組分
| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |
| 探針法qPCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |
| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶及Taq酶 |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及陰性對照 |
| 引物-探針混合液 | 100μL | 特異性擴(kuò)增靶序列 |
| 陽性對照（1×10^8拷貝/μL） | 50μL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 |
| 說明書 | 1份 | 操作指南 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽性對照按10倍梯度稀釋（10^7~10^2拷貝/μL），每個梯度獨立操作以避免污染。
2. 樣本處理
提取待測樣本RNA/DNA，建議設(shè)置陰性（NC）和陽性對照（PC）。
3. PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 組分 | 體積（μL） |
| qPCR緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探針混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
4. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
|------|------|------|
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
結(jié)果分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct≤35，擴(kuò)增曲線呈指數(shù)增長。
可疑：35<Ct<40，需復(fù)測確認(rèn)。
陰性：Ct≥40或無擴(kuò)增。
注意事項
分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增區(qū)），避免交叉污染。
使用帶濾芯槍頭，試劑避免反復(fù)凍融。
陽性對照需最后加入，防止氣溶膠污染。
實驗廢棄物需按生物安全規(guī)范處置。
免責(zé)聲明
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷或其他非科研用途。
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關(guān)鍵字： 廣防己;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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