技術原理
采用 TaqMan探針法實時熒光PCR技術，針對穿山甲基因保守區(qū)域設計特異性引物及探針。通過熒光信號實時監(jiān)測擴增過程，實現(xiàn)高靈敏度（檢測限低至10拷貝/μL）和高特異性（與相近物種無交叉反應）。
適用場景：穿山甲核酸的定性或定量檢測，用于科研用途，不適用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | 穿山甲探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Squama Manitis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5161 |
試劑盒組成
核心組分：
預混PCR反應液（含酶、dNTPs、緩沖液）
穿山甲特異性引物-探針干粉
陽性對照（人工合成DNA片段，10^7拷貝/μL）
陰性對照（無核酸酶水）
熒光PCR專用模板稀釋液
自備耗材：
無DNA/RNA污染的離心管、濾芯吸頭、熒光定量PCR儀（兼容ABI、Bio-Rad等主流機型）。
操作流程
1. 樣本處理
樣本類型：組織、血液、分泌物等，需提取DNA（推薦商品化提取試劑盒）。
保存條件：短期-20℃，長期-70℃，避免反復凍融。
2. 試劑配制
解凍后渦旋混勻，按比例配制反應體系（20μL/反應）：
反應液19.5μL + 擴增液0.5μL + 模板DNA 5μL。
3. PCR擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 擴增 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| | 55-60℃ | 30 sec | |
4. 結果判讀
陽性：Ct值≤35，擴增曲線呈S型。
陰性：Ct值≥40或無擴增曲線。
灰區(qū)（Ct 35-40）：建議復測。
性能參數(shù)
靈敏度：最低檢測限10-100拷貝/μL。
特異性：與常見病毒及近源物種無交叉反應。
重復性：批內(nèi)/批間變異系數(shù)＜5%。
注意事項
防污染：分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴增區(qū)），使用濾芯吸頭。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰/陽性對照。
保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融（≤7次），有效期12個月。
局限性：
基因突變可能導致假陰性；
樣本降解或提取效率低影響結果準確性。
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關鍵字： 穿山甲;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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