花生源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 花生源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Peanut-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5317 |
產品概述
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術，專用于檢測樣品中花生源性成分的核酸，適用于科研領域的定性及定量分析。試劑盒包含優(yōu)化的引物探針組合、陽性對照及反應緩沖體系，具有高靈敏度和特異性，可有效避免與其他微生物DNA的交叉反應。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/數(shù)量 |
| qPCR緩沖液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 50μL |
| 引物-探針干粉 | 50次反應 |
| 陽性對照（10^7拷貝/μL） | 50μL |
| 模板稀釋液 | 1mL |
操作步驟
1. 標準曲線制備
稀釋陽性對照：按10倍梯度稀釋（10^1–10^6拷貝/μL），使用帶濾芯槍頭，獨立操作區(qū)避免污染。
標記離心管：6管（6號至1號），依次加入稀釋液并混勻，冰上保存。
2. 樣本DNA提取
建議設置陰性對照（NC）和陽性對照（PC），采用兼容的DNA提取試劑盒。
3. qPCR反應體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對照（μL） | 標準曲線管（μL） |
| qPCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 引物-探針混合液 | 3 | 3 | 3 |
| 模板DNA | 5 | — | — |
| 標準品/超純水 | — | 5（水） | 5（梯度標準品） |
4. 擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 預變性 | 94℃ | 10分鐘 |
| 循環(huán)（40次） | 94℃ | 15秒 |
| | 60℃ | 1分鐘（采集FAM信號） |
結果分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算樣本拷貝數(shù)。
定性檢測：
陽性：Ct≤39，擴增曲線典型；
陰性：Ct≥40；
灰區(qū)（39<Ct<40）：需復測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行，避免交叉污染。
防污染措施：使用一次性耗材，實驗后以10%次氯酸或75%酒精清潔臺面。
質量控制：每次實驗需包含陰/陽性對照。
運輸與儲存：避免反復凍融，解凍后需離心混勻。
局限性
檢測結果受樣本質量、提取方法及操作規(guī)范影響。
基因突變可能導致假陰性；污染可能導致假陽性。
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關鍵字： 花生源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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