產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術(shù)，專用于檢測錦鯉皰疹病毒（Koi Herpesvirus, KHV）的Sph基因。通過實時監(jiān)測熒光信號，實現(xiàn)對病毒DNA的定性和定量分析，適用于科研領(lǐng)域（不可用于臨床診斷）。
產(chǎn)品名稱 | 錦鯉皰疹病毒Sph基因探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Koi Herpesvirus Sph Gene Probe-based Real-time PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5214 |
產(chǎn)品特點
高靈敏度與特異性：
引物及探針針對Sph基因保守區(qū)設(shè)計，檢測限低至100拷貝/反應(yīng)，與其他病毒無交叉反應(yīng)。
提供無傳染性DNA片段作為陽性對照，避免假陰性結(jié)果。
即開即用：
用戶僅需提供樣品DNA或RNA（視產(chǎn)品版本而定），試劑盒包含預(yù)混緩沖液、酶混合液及優(yōu)化引物-探針組合。
多重應(yīng)用：
支持絕對定量（標準曲線法）、相對表達分析及SNP檢測。
穩(wěn)定性：
-20℃避光保存，有效期12個月，避免反復(fù)凍融。
規(guī)格與成分
| 成分 | 規(guī)格/包裝 | 主要功能 |
| qPCR緩沖液 | 500 μL | 反應(yīng)體系基礎(chǔ)液 |
| 酶混合液 | 100 μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶（若需）及Taq酶 |
| 引物-探針混合液 | 100 μL | 特異性擴增Sph基因 |
| 熒光探針 | 50 μL | 5'端FAM標記，3'端淬滅 |
| 陽性對照（1×10^8拷貝/μL） | 50 μL | 標準曲線制備 |
| 模板稀釋液 | 1 mL | 標準品梯度稀釋 |
實驗流程
1. 標準曲線制備
將陽性對照按10倍梯度稀釋（10^2–10^7拷貝/μL），獨立操作避免污染。
2. 樣品處理
提取待測樣本DNA/RNA，建議設(shè)置陰性對照（超純水）及制備對照（陽性樣本稀釋液）。
3. qPCR反應(yīng)體系（20 μL）
| 組分 | 體積（μL） |
| 緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探針混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
4. 擴增程序
逆轉(zhuǎn)錄（若需）：50℃ 30 min
預(yù)變性：94℃ 10 min
PCR循環(huán)（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號）
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣本拷貝數(shù)。
定性檢測：陰性對照Ct值≥40，樣本Ct值低于閾值判為陽性。
注意事項
操作需在獨立區(qū)域進行，避免氣溶膠污染。
探針干粉使用前需離心并溶解于超純水（165 μL）。
運輸及保存需全程-20℃避光，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 錦鯉皰疹病毒Sph基因;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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