檢驗(yàn)原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)錦鯉皰疹病毒Sph基因的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物。在PCR擴(kuò)增過程中，SYBR Green染料與雙鏈DNA結(jié)合后釋放熒光信號(hào)，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)KHV核酸的定性及定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 錦鯉皰疹病毒Sph基因染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Koi Herpesvirus Sph Gene Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3061 |
試劑盒組成
PCR預(yù)混液（MagicMix 3.0）：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及SYBR Green染料（1 mL，紅蓋）。
超純水：無核酸酶污染（1 mL，亮黃色蓋）。
Sph基因特異性引物混合液：優(yōu)化設(shè)計(jì)的正向/反向引物（100 μL，白蓋）。
陽性對(duì)照：含1×10^8拷貝/μL的KHV Sph基因片段（50 μL，黃蓋）。
核酸釋放劑（試用裝）：用于樣本前處理（1 mL，綠蓋，20次用量）。
使用說明書：1份。
運(yùn)輸與儲(chǔ)存
低溫運(yùn)輸（-20℃避光），-20℃保存，有效期12個(gè)月。
陽性對(duì)照需單獨(dú)存放，避免污染其他組分。
操作步驟
反應(yīng)體系配制（建議冰上操作）：
每40μL反應(yīng)體系包含：
PCR預(yù)混液 20μL
引物混合液 2μL
待測(cè)DNA模板 5μL
超純水補(bǔ)足至40μL。
陽性對(duì)照：以5μL陽性對(duì)照替代待測(cè)模板。
擴(kuò)增程序（以主流qPCR儀為例）：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘；
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）。
結(jié)果判讀：
陰性：無擴(kuò)增曲線或Ct值≥40；
陽性：出現(xiàn)典型S型擴(kuò)增曲線且Ct值在預(yù)期范圍內(nèi)（需與陽性對(duì)照比對(duì)）。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，避免交叉污染。
建議重復(fù)檢測(cè)3次以提高準(zhǔn)確性。
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關(guān)鍵字： 錦鯉皰疹病毒Sph基因;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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