環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)含量測(cè)定試劑盒/48 樣

測(cè)定意義：

環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（Guanosine  3’ ，5’-cyclic  monophosphate ，cGMP）是一種重要的具有生物活性的環(huán)核苷酸類(lèi)物質(zhì)，廣泛存在于生物體內(nèi)。cGMP 作為生命信息傳遞的“第二信使”，不僅參與機(jī)體多種酶的代謝過(guò)程，對(duì)細(xì)胞的分裂、分化和發(fā)育起著重要的調(diào)節(jié)作用，而且還可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和翻譯，影響蛋白質(zhì)合成。

測(cè)定原理：

cGMP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色譜法測(cè)定其含量。

自備儀器和用品：

高效液相色譜儀、低速離心機(jī)、溶劑抽濾裝置、氮吹儀、渦旋振蕩器、針頭式過(guò)濾器（水系，50 個(gè)，0.22μm）、濾膜（水系和有機(jī)系各 1 個(gè)，0.45  μm）、C18 柱（耐水，4.6  ×250 mm）、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個(gè)，2  mL）、內(nèi)襯管（50 個(gè)，放置在樣品瓶?jī)?nèi)用于微量樣品進(jìn)樣）、甲醇（色譜級(jí)，200 mL）和超純水。

cGMP 含量測(cè)定操作步驟：

1. 開(kāi)啟電腦、檢測(cè)器和泵，安裝上色譜柱，打開(kāi)軟件，在方法組中設(shè)置進(jìn)樣量 10   μL，流速 0.8 mL/min，柱溫 30  ℃,測(cè)試時(shí)間 45 min，檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm，設(shè)置完畢保存方法組。

2. 用流動(dòng)相過(guò)柱子，待基線穩(wěn)定后開(kāi)始加樣。

3. 加入標(biāo)準(zhǔn)品 10 μL，在 45 min 內(nèi)可分離 cGMP ，cGMP 的保留時(shí)間在 10 min 左右（柱子不同，保留時(shí)間有差異），計(jì)算不同濃度的 cGMP 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積。

4. 加入樣品 10 μL，在相應(yīng)保留時(shí)間處檢測(cè) cGMP 的峰面積。

注 意：

1 、本試劑盒檢測(cè)限為 1 ug/mL，若 cGMP 含量低于該濃度需要對(duì)樣品濃縮，或選擇 cGMP含量 ELISA 試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

2 、為了避免使用過(guò)程中柱壓過(guò)大，流速由小到大調(diào)節(jié)。

3 、使用完畢時(shí)，先以 20%甲醇水溶液沖洗色譜柱 1 h，再用純甲醇洗色譜柱 30 min。

4 、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)要根據(jù)樣品中 cGMP 濃度確定，樣品中 cGMP 的峰面積必須落在不同濃度的 cGMP 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積之內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)品稀釋倍數(shù)只是一個(gè)參考。