檢驗(yàn)原理

高靈敏度:檢測(cè)限達(dá)100拷貝/反應(yīng),引物針對(duì)DAEC保守序列設(shè)計(jì),避免交叉反應(yīng)。
雙重用途:支持定性與定量分析,定量線性范圍≥5個(gè)數(shù)量級(jí)。
即開(kāi)即用:僅需提供樣品DNA模板,含陽(yáng)性對(duì)照(非傳染性DNA片段)以排除假陰性。
產(chǎn)品名稱 | 彌散黏附性大腸桿菌(大腸埃希菌)染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Diffusely Adherent E.coli (DAEC) Dye-Based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR2706 |

使用方法

試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(以10^1–10^6拷貝/μL為例):
標(biāo)記6管(6–1號(hào)),每管加45μL模板稀釋液。
6號(hào)管加5μL 10^7拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照,震蕩混勻得10^6拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品,依次10倍稀釋至1號(hào)管。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
反應(yīng)體系:20μL/反應(yīng),含DNA模板、預(yù)混引物及染料。
儀器設(shè)置:
熒光通道:選擇FAM(檢測(cè)通道),無(wú)需淬滅通道。
循環(huán)參數(shù):
預(yù)變性:95℃ 2min(1循環(huán));
擴(kuò)增:95℃ 15s → 60℃ 30s(45循環(huán),60℃時(shí)采集熒光信號(hào))。
結(jié)果分析
閾值設(shè)定:調(diào)整Baseline(Start 3–15,End 5–20),確保閾值線位于指數(shù)擴(kuò)增期。
判讀標(biāo)準(zhǔn):
陽(yáng)性:Ct值≤35,擴(kuò)增曲線呈S型;
陰性:無(wú)Ct值或曲線平直。
注意事項(xiàng)

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋需在獨(dú)立區(qū)域操作,避免污染。
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作(試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增分析),防止交叉污染。
質(zhì)量控制
陽(yáng)性對(duì)照:應(yīng)顯示典型擴(kuò)增曲線,Ct值在預(yù)期范圍內(nèi)。
陰性對(duì)照:無(wú)擴(kuò)增信號(hào)。
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關(guān)鍵字: 彌散黏附性大腸桿菌(大腸埃希菌);染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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