蘋果黑星病菌染料法熒光定量 PCR 試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 蘋果黑星病菌染料法熒光定量 PCR 試劑盒 | 英文名稱 | Venturia inaequalis Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR2649 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒專用于檢測(cè)蘋果黑星病菌（Venturia inaequalis）的DNA，采用染料法熒光定量PCR技術(shù)，具有高靈敏度和特異性。適用于科研領(lǐng)域，可進(jìn)行定性和定量分析，線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)。
產(chǎn)品組成
PCR反應(yīng)液：包含優(yōu)化的引物、熒光染料及緩沖體系。
陽(yáng)性對(duì)照：無傳染性的DNA片段（標(biāo)準(zhǔn)曲線模板）。
陰性對(duì)照：無核酸水，用于排除污染。
酶混合物：含熱啟動(dòng)DNA聚合酶，確保擴(kuò)增特異性。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
有效期：12個(gè)月（詳見包裝標(biāo)簽）。
使用方法
1. 樣品準(zhǔn)備
提取待測(cè)樣品DNA，建議濃度≥10 ng/μL，純度（A260/A280）為1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測(cè)適用）
標(biāo)記6支離心管（7至2號(hào)），每管加入45 μL模板稀釋液。
在7號(hào)管中加入5 μL陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL），震蕩混勻，得到1×10^7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)品。依次10倍稀釋至1×10^2拷貝/μL。
3. PCR反應(yīng)體系配制
每20 μL反應(yīng)體系包含：
10 μL 2×PCR預(yù)混液（含染料）
0.5 μL正向/反向引物（終濃度0.2 μM）
2 μL模板DNA（樣品或標(biāo)準(zhǔn)品）
補(bǔ)無核酸水至20 μL。
4. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 熒光采集 | 60℃ | 30 sec | |
注：退火溫度可根據(jù)引物特性調(diào)整（建議55-65℃）。
結(jié)果分析
定性檢測(cè)：Ct值≤35且擴(kuò)增曲線呈S型判為陽(yáng)性。
定量檢測(cè)：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，避免交叉污染。
陽(yáng)性對(duì)照與樣品應(yīng)分區(qū)域處理，使用帶濾芯槍頭。
試劑解凍后需徹底混勻，短暫離心后使用。
本產(chǎn)品僅限科研用途，不可用于臨床診斷。
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