近平滑念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 近平滑念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Candida parapsilosis Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR2660 |
產品概述
本試劑盒采用SYBR Green I染料法熒光定量PCR技術，專用于檢測近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）的核酸。通過優(yōu)化引物體系和反應條件，可實現(xiàn)高靈敏度、高特異性的定量檢測，適用于臨床樣本、環(huán)境樣本及科研中的核酸分析。
試劑盒組分
2×熒光PCR預混液：含SYBR Green I染料、dNTPs、耐熱DNA聚合酶及優(yōu)化緩沖體系。
陽性對照：預稀釋的近平滑念珠菌DNA片段（10^8拷貝/μL），需按說明書進一步稀釋。
陰性對照：無核酸酶水。
模板稀釋液：用于標準品梯度制備。
注：具體組分以實際包裝清單為準。
操作步驟
標準品稀釋（以10^2-10^7拷貝/μL梯度為例）：
標記6管，分別加入45 μL模板稀釋液。
取5 μL陽性對照（10^8拷貝/μL）加入第1管，震蕩混勻得10^7拷貝/μL標準品，依次稀釋至10^2拷貝/μL。
稀釋需在獨立區(qū)域操作，避免交叉污染。
PCR反應體系配制（20 μL體系）：
2×預混液：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
無核酸酶水：補至20 μL
擴增程序：
預變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）
熔解曲線分析：60℃至95℃，每0.5℃遞增。
性能參數
靈敏度：可檢測低至10拷貝/μL的靶標DNA。
特異性：不與其他念珠菌屬或常見微生物DNA交叉反應。
重復性：CV值≤5%（高、中、低濃度模板）。
線性范圍：10^2-10^7拷貝/μL（R2≥0.99）。
注意事項
實驗需在分區(qū)（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)）內完成，避免氣溶膠污染。
陽性對照含非感染性DNA片段，但仍需按生物安全規(guī)范處理。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰值，否則提示非特異性擴增。
儲存與有效期
未開封試劑盒：-20℃避光保存，有效期12個月。
開封后預混液：4℃保存不超過1個月，避免反復凍融。
應用范圍
適用于科研用途，不用于臨床診斷。
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關鍵字： 近平滑念珠菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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