立枯絲核菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 立枯絲核菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Rhizoctonia solani Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR2684 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于染料法熒光定量PCR技術(shù)開發(fā)，專用于立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）的快速、高靈敏度檢測。適用于科研領(lǐng)域的定性及定量分析，具有操作簡便、特異性強(qiáng)、線性范圍廣等特點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)流程
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本拷貝數(shù)。
定性檢測：Ct值≤35且熔解峰單一判為陽性。
注意事項(xiàng)
嚴(yán)格分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增），避免交叉污染。
使用一次性耗材及專用工作服，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%乙醇清潔臺(tái)面。
反應(yīng)液需避光保存，避免反復(fù)凍融。
若用于定量，建議每個(gè)樣本設(shè)3次技術(shù)重復(fù)。
產(chǎn)品規(guī)格
規(guī)格：50次/盒（20 μL體系）。
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
聲明
本試劑盒僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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