驢源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 驢源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Donkey-derived Component Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3197 |
產品概述
本試劑盒基于SYBR Green I 染料法熒光定量PCR技術，專用于快速、特異性檢測食品、藥品、飼料或其他樣品中的驢源性成分（Donkey-derived DNA）。適用于物種真實性鑒定、原料溯源、摻假檢測及市場監(jiān)管等領域。
檢測原理
DNA提取：樣本中提取基因組DNA。
特異性擴增：針對驢線粒體DNA (mtDNA) 保守區(qū)域設計引物，僅擴增驢源性DNA片段。
熒光信號采集：SYBR Green I 染料嵌入雙鏈DNA中，熒光強度與產物量正相關，實時監(jiān)測擴增曲線。
定量/定性分析：通過Ct值判定樣本中驢源性成分是否存在，標準曲線可實現(xiàn)半定量分析。
試劑盒組分
| 組分名稱 | 體積/數量 | 用途說明 |
| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 1.25 mL | 含酶、dNTPs、染料、緩沖體系 |
| 驢源性引物混合液（干粉/凍干） | 2管 | 特異性引物（需復溶） |
| 陰性對照（NC） | 200 μL | 無菌超純水 |
| 陽性對照（PC） | 200 μL | 已知濃度驢DNA標準品 |
| DNA提取試劑（可選） | 1套 | 柱式/磁珠法DNA提取試劑 |
技術參數
| 項目 | 性能指標 |
| 檢測靈敏度 | ≤10拷貝/μL DNA |
| 特異性 | 不與非驢物種（馬、牛、豬、羊等）交叉反應 |
| 線性范圍 | 102~10? 拷貝/μL（R2≥0.99） |
| 重復性 | Ct值變異系數（CV）≤2.5% |
| 擴增效率 | 90%~110% |
操作步驟
1. DNA提取
使用配套試劑或商用DNA提取試劑盒處理樣本，建議DNA濃度≥10 ng/μL。
2. PCR反應體系配制（20 μL體系）
| 組分 | 體積 |
| 2× SYBR Green Master Mix | 10 μL |
| 驢源性引物混合液 | 0.8 μL（終濃度0.4 μM） |
| DNA模板 | 2 μL |
| ddH?O | 補足至20 μL |
對照設置：每批次需設陰性對照（NC）和陽性對照（PC）。
3. qPCR程序設置
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 | 信號采集 |
| 預變性 | 95℃ | 5 min | 1 | - |
| 擴增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |
| | 60℃ | 30 sec | | |
| 熔解曲線 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升 | 1 | 是 |
結果判讀
陽性：
擴增曲線呈S"型，Ct值≤35；
熔解曲線為單一特異峰（Tm值：____±1℃）。
陰性：
無擴增曲線或Ct值≥40；
熔解曲線無峰或雜峰。
注意：35 < Ct < 40 需復測確認。
注意事項
實驗全程在獨立潔凈區(qū)域操作，避免氣溶膠污染。
使用前充分解凍混勻，避免反復凍融（建議分裝）。
熔解曲線分析是區(qū)分非特異性擴增的關鍵步驟。
若檢測復雜基質（如熟肉、加工食品），建議增加DNA純化步驟。
質量控制
陽性對照：必須正常擴增（Ct值在預期范圍內）。
陰性對照：無擴增信號（Ct值=40或Undetected）。
熔解曲線：陽性樣本應為單峰，無雜峰。
應用場景
阿膠、肉制品、保健品中驢源性成分鑒定
飼料中違禁動物成分篩查
物種司法鑒定與溯源
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關鍵字： 驢源性成分;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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