禽腎炎病毒2型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 禽腎炎病毒2型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Avian Nephritis Virus 2 (ANV-2) Dye-based qRT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3256 |
試劑盒組成
2×qPCR Magic Mix：500 μL（棕色管，含預(yù)混熒光染料）
熒光PCR專用模板稀釋液：1 mL（黃蓋）
禽腎炎病毒2型qPCR引物混合液：100 μL（白蓋，特異性引物）
陽性對(duì)照：1管（病毒基因組標(biāo)準(zhǔn)品）
陰性對(duì)照：無核酸酶水
性能特點(diǎn)
高靈敏度：采用熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)限低至10拷貝/μL。
特異性強(qiáng)：引物針對(duì)ANV-2保守區(qū)設(shè)計(jì)，避免與其他微生物交叉反應(yīng)。
操作簡(jiǎn)便：一管式閉管操作，減少污染風(fēng)險(xiǎn)，支持“即開即用”。
穩(wěn)定性高：預(yù)混試劑優(yōu)化反應(yīng)體系，重復(fù)性良好。
通量適配：每盒可完成50次20μL反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣品RNA制備
樣本數(shù)（N）需額外設(shè)置陽性對(duì)照（PC）和陰性對(duì)照（NC），總計(jì)提取N+2個(gè)RNA樣本。
推薦使用柱式病毒RNA提取試劑（兼容市售多數(shù)）。
PC建議采用10μL陽性對(duì)照的1000倍稀釋液，NC使用無核酸酶水。
2. RT-PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（N+2） | RT-PCR陰性對(duì)照 | RT-PCR陽性對(duì)照 |
| 5×雙酶一管式RT-PCR Buffer | 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 模板RNA | 2 μL | - | 2 μL（陽性對(duì)照）|
| 無核酸酶水 | 補(bǔ)足至20 μL | 補(bǔ)足至20 μL | 補(bǔ)足至20 μL |
3. 擴(kuò)增程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘 → 預(yù)變性：95℃ 5分鐘 → 循環(huán)（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)前需分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免交叉污染。
陽性對(duì)照需與待測(cè)樣本分裝于不同批次，防止假陽性。
反應(yīng)體系需避光配制，熒光染料對(duì)光敏感。
質(zhì)量控制
陰性對(duì)照：應(yīng)無擴(kuò)增曲線（Ct值≥40或無信號(hào)）。
陽性對(duì)照：Ct值需≤30，否則需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
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關(guān)鍵字： 禽腎炎病毒2型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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