產(chǎn)品概述
本試劑盒專用于念珠狀鏈桿菌（Streptobacillus moniliformis）的染料法熒光定量PCR檢測，具備高靈敏度和特異性，適用于定性及定量分析。定量檢測線性范圍覆蓋至少5個數(shù)量級，可滿足臨床、科研及環(huán)境樣本的檢測需求。
產(chǎn)品名稱 | 念珠狀鏈桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptobacillus moniliformis Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3355 |
包裝規(guī)格及成分
規(guī)格：50次/盒（20μL反應體系）
核心組分：
2×熒光定量PCR預混液（含SYBR Green染料、dNTPs、Mg2?及穩(wěn)定劑）
引物混合液（特異性靶向念珠狀鏈桿菌保守序列）
陽性對照（1×10?拷貝/μL DNA片段，非活體樣本，避免生物污染風險）
陰性對照（無核酸酶水）
10×ROX參比染料（適配部分機型，需根據(jù)儀器要求選擇添加）
實驗流程
1. 樣本制備與DNA提取
樣本數(shù)量：若檢測N個樣本，需額外設(shè)置2個對照（N+2），包括：
陽性對照（PC）：使用試劑盒提供的陽性對照DNA（10μL，1×10?拷貝/μL）稀釋至與樣本相同體積。
陰性對照（NC）：以無核酸酶水替代樣本。
DNA提?。杭嫒菔惺奂毦鶧NA提取試劑盒，建議按所選試劑盒說明書操作。
2. 標準曲線制備（定量檢測適用）
稀釋步驟：
標記離心管（7至2號），依次加入45μL模板稀釋液。
梯度稀釋陽性對照（從1×10?拷貝/μL開始，10倍遞減至1×102拷貝/μL），每步需更換槍頭并充分混勻。
注意事項：稀釋需在獨立區(qū)域進行，避免交叉污染。
3. PCR擴增程序
反應體系：20μL（含2μL模板DNA）
推薦循環(huán)參數(shù)：
預變性：95℃ 5分鐘
擴增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)，采集熒光信號）
熔解曲線分析：60℃→95℃（0.5℃/秒）
4. 結(jié)果分析
定性檢測：熔解曲線單峰且Ct值≤35判為陽性。
定量檢測：根據(jù)標準曲線計算拷貝數(shù)。
質(zhì)控要求：
陰性對照無擴增（Ct值≥40或無信號）。
陽性對照Ct值在預期范圍內(nèi)。
注意事項
污染控制：實驗分區(qū)操作（樣本制備、PCR配制、擴增區(qū)），使用帶濾芯槍頭。
電泳驗證：若需確認擴增產(chǎn)物，建議使用1.5%-2.0%瓊脂糖凝膠，預期條帶約200bp。
無效實驗判定：若陰性對照出現(xiàn)擴增，表明污染，需終止實驗并排查原因。
儲存與穩(wěn)定性
保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融（有效期12個月）。
運輸：干冰或冰袋低溫運輸。
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關(guān)鍵字： 念珠狀鏈桿菌;染料法;PCR試劑盒;
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