產品概述

本試劑盒采用染料法熒光定量RT-PCR技術,專用于檢測內羅畢羊病病毒(NSDV)核酸,具有高特異性、靈敏度(可達幾百拷貝/反應)和快速檢測特點。適用于臨床樣本、動物組織及環(huán)境樣本的病毒檢測。
產品名稱 | 內羅畢羊病病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Nairobi Sheep Disease Virus (NSDV) Dye-based qRT-PCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR3360 |

產品組成

2×qPCR MagicMix:500 μL(預混含熒光染料,最大吸收光譜471 nm,結合DNA后為500 nm,發(fā)射光譜530 nm)。
熒光PCR專用模板稀釋液:1 mL(用于陽性對照梯度稀釋)。
NSDV特異性引物混合物:100 μL(針對病毒保守序列設計,無交叉反應)。
陽性對照(1×10? 拷貝/μL):50 μL(需獨立稀釋,避免污染)。
使用手冊:1份。
注:需自備DNA模板、10×ROX(根據機型需求)。
樣本處理
液體樣本:取2-3 mL,13,000 rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀加50 μL DNA抽提液混勻,100℃裂解10分鐘,離心后取5 μL上清用于PCR。
其他樣本:按常規(guī)方法采集,-20℃保存,運輸需泡沫箱加冰密封。
操作步驟

陽性對照稀釋
標記6管,依次加入45 μL稀釋液,梯度稀釋陽性對照(10?–102 拷貝/μL),每步換槍頭并充分震蕩。
稀釋需在獨立區(qū)域進行,避免污染。
PCR反應
反應體系:20 μL/反應(含5 μL模板)。
程序:
預變性:92℃ 5分鐘;
擴增(30循環(huán)):94℃ 60秒 → 50℃ 60秒 → 72℃ 60秒;
信號采集:復性或延伸階段(530 nm)。
結果判讀
陽性:Ct值<35,S型曲線;
陰性:Ct值>38或無Ct值;
可疑:Ct值35–38需復檢,重復陽性則判定為陽性。
注意事項

操作分區(qū)進行,避免交叉污染;
試劑使用前充分混勻,避光保存;
實驗后工作臺需用10%次氯酸或75%酒精消毒;
陽性對照單獨存放,運輸保存期限1年(-20℃)。
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關鍵字: 內羅畢羊病病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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