消化鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 消化鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Peptostreptococcus spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3849 |
檢驗原理
采用SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術，針對消化鏈球菌屬（Peptostreptococcus）的保守基因序列設計特異性引物。通過熒光信號實時監(jiān)測核酸擴增，實現(xiàn)定性或定量分析，靈敏度高（檢測下限可達10^2拷貝/μL），特異性強（避免與其他細菌DNA交叉反應）。
試劑盒組分
預混液：含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及SYBR Green染料（即開即用）。
陽性對照：消化鏈球菌靶基因片段（非活菌，濃度1×10^8拷貝/μL）。
陰性對照：無核酸酶水。
模板稀釋液：用于標準曲線制備。
操作步驟
1. 樣本處理
臨床樣本（糞便、病灶分泌物）：需提取DNA（推薦使用柱式提取試劑盒）。
食品/環(huán)境樣本：按標準預處理后提取DNA。
2. 反應體系配置（20 μL/反應）
| 組分 | 體積（μL） |
| 預混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 無核酸酶水 | 6 |
3. PCR程序設置（以ABI 7500為例）
預變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光）
熔解曲線分析：60℃至95℃，每0.5℃遞增
質量控制
陰性對照（NTC）：應無擴增曲線。
陽性對照：Ct值需在預期范圍內(nèi)（如Ct<30）。
技術重復：建議3復孔，CV值≤5%。
注意事項
避免反復凍融試劑，解凍后需渦旋混勻并短暫離心。
操作分區(qū)進行（樣本處理、PCR配置、擴增區(qū)），防止污染。
熔解曲線應呈現(xiàn)單一峰，雜峰提示非特異性擴增。
結果判讀
定性：Ct值≤35且熔解曲線符合為陽性。
定量：通過標準曲線計算拷貝數(shù)（需用戶自備梯度稀釋標準品）。
儲存與有效期
-20℃避光保存，有效期12個月。
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關鍵字： 消化鏈球菌通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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