厭氧消化鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 厭氧消化鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Peptostreptococcus anaerobius Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3848 |
檢驗原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術(shù)，針對厭氧消化鏈球菌（Anaerotruncus colihominis）基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物。通過熒光信號實時監(jiān)測核酸擴增過程，實現(xiàn)定性及定量檢測。反應(yīng)體系中若存在目標(biāo)核酸模板，PCR擴增將釋放熒光信號，儀器通過相應(yīng)通道采集數(shù)據(jù)并分析結(jié)果。
產(chǎn)品特點
高靈敏度：優(yōu)化引物設(shè)計，檢測限低至10拷貝/μL。
特異性強：引物經(jīng)嚴(yán)格驗證，避免與其他微生物DNA交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混反應(yīng)液含所有必要組分（除模板DNA），減少操作步驟。
雙重質(zhì)控：提供陽性對照（非活體DNA片段）和陰性對照（無模板對照，NTC），確保結(jié)果可靠性。
寬動態(tài)范圍：定量檢測線性范圍覆蓋5個數(shù)量級（10^2–10^7拷貝/μL）。
操作步驟
樣本準(zhǔn)備
DNA提?。?/span>
臨床樣本（如糞便、病灶分泌物）需按標(biāo)準(zhǔn)方法提取DNA，推薦使用柱式提取試劑盒。
提取后DNA建議稀釋至Ct值20–30范圍內(nèi)（可用無菌超純水或1×稀釋緩沖液調(diào)整）。
陽性對照稀釋（若需定量）：
按10倍梯度稀釋陽性對照（10^2–10^7拷貝/μL），獨立操作以避免污染。
PCR反應(yīng)體系配置
試劑解凍與混勻：
從-20℃取出預(yù)混液，冰上解凍后輕柔顛倒混勻，避免氣泡。
短暫離心（1000 rpm，5–10秒）收集管壁液體。
反應(yīng)體系（20μL/孔）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2×預(yù)混液（含染料） | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-free H?O | 6 |
加樣建議：
每樣本設(shè)置3次技術(shù)重復(fù)，并包含NTC（以水替代模板）及陽性對照。
上機檢測
程序設(shè)置（以常見機型為例）：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）
熔解曲線分析：60–95℃，每0.5℃遞增
數(shù)據(jù)分析：
定性檢測：Ct值≤35且熔解曲線單一峰判為陽性。
定量檢測：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算模板拷貝數(shù)。
注意事項
實驗分區(qū)操作（樣本處理、PCR配置、擴增區(qū)分離），避免氣溶膠污染。
試劑解凍后宜立即使用，避免反復(fù)凍融（≤3次）。
若熔解曲線出現(xiàn)非特異峰，需優(yōu)化退火溫度或重新設(shè)計引物。
儲存與有效期
儲存條件：-20℃避光保存
有效期：12個月
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關(guān)鍵字： 厭氧消化鏈球菌;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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