檢驗原理

本試劑盒基于SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術,針對肺炎鏈球菌基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物,通過熒光信號實時監(jiān)測核酸擴增過程,實現(xiàn)定性及定量檢測。反應體系中若存在目標核酸模板,PCR擴增將釋放熒光信號,經儀器分析后可確定樣本中肺炎鏈球菌的載量。
產品名稱 | 肺炎鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus pneumoniae Dye-based qPCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR4389 |

產品特點

高靈敏度:優(yōu)化引物設計,檢測限可達10^2拷貝/μL。
特異性強:引物經嚴格驗證,避免與其他病原體核酸交叉反應。
即開即用:預混反應液含PCR所需全部組分(除模板DNA),減少操作步驟。
雙重質控:提供陽性對照(DNA片段)和陰性對照(無模板對照,NTC),確保結果可靠性。
寬線性范圍:定量檢測覆蓋5個數(shù)量級(10^2~10^7拷貝/μL)。
操作流程

樣本處理
臨床樣本(如痰液、血液、腦脊液):需先提取DNA,建議使用配套核酸提取試劑盒。
質量控制:提取后DNA需測定濃度及純度(A260/A280比值1.8~2.0)。
試劑準備
解凍預混液并離心混勻,避免反復凍融。
按以下體系配制反應液(單次反應):
預混液:10 μL
引物混合液:2 μL
模板DNA:2 μL
無菌水:6 μL
PCR擴增
反應程序(以ABI 7500為例):
預變性:95℃ 3分鐘
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光)
溶解曲線分析:60℃至95℃,每0.5℃遞增
結果判讀
定性檢測:Ct值≤35且溶解曲線為單一峰,判為陽性。
定量檢測:根據(jù)標準曲線計算拷貝數(shù)。
注意事項

實驗分區(qū)操作,避免氣溶膠污染。
陽性對照需獨立稀釋,嚴禁直接接觸其他組分。
溶解曲線異常可能提示引物二聚體或非特異性擴增,需重新優(yōu)化條件。
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關鍵字: 肺炎鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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