檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)肺炎鏈球菌基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定性及定量檢測(cè)。反應(yīng)體系中若存在目標(biāo)核酸模板，PCR擴(kuò)增將釋放熒光信號(hào)，經(jīng)儀器分析后可確定樣本中肺炎鏈球菌的載量。
產(chǎn)品名稱 | 肺炎鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus pneumoniae Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4389 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，檢測(cè)限可達(dá)10^2拷貝/μL。
特異性強(qiáng)：引物經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證，避免與其他病原體核酸交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混反應(yīng)液含PCR所需全部組分（除模板DNA），減少操作步驟。
雙重質(zhì)控：提供陽性對(duì)照（DNA片段）和陰性對(duì)照（無模板對(duì)照，NTC），確保結(jié)果可靠性。
寬線性范圍：定量檢測(cè)覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)（10^2~10^7拷貝/μL）。
操作流程
樣本處理
臨床樣本（如痰液、血液、腦脊液）：需先提取DNA，建議使用配套核酸提取試劑盒。
質(zhì)量控制：提取后DNA需測(cè)定濃度及純度（A260/A280比值1.8~2.0）。
試劑準(zhǔn)備
解凍預(yù)混液并離心混勻，避免反復(fù)凍融。
按以下體系配制反應(yīng)液（單次反應(yīng)）：
預(yù)混液：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
無菌水：6 μL
PCR擴(kuò)增
反應(yīng)程序（以ABI 7500為例）：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光）
溶解曲線分析：60℃至95℃，每0.5℃遞增
結(jié)果判讀
定性檢測(cè)：Ct值≤35且溶解曲線為單一峰，判為陽性。
定量檢測(cè)：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作，避免氣溶膠污染。
陽性對(duì)照需獨(dú)立稀釋，嚴(yán)禁直接接觸其他組分。
溶解曲線異?？赡芴崾疽锒垠w或非特異性擴(kuò)增，需重新優(yōu)化條件。
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