人牙齦成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
英文名稱 | Human Gingival Fibroblast Cells | 種屬 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 貨號 | A01X1469 |
組織來源 | 牙齦組織 | 生長特性 | 貼壁 |
細(xì)胞簡介：
人牙齦成纖維分離自牙齦組織；牙齦指緊貼于牙頸周圍及鄰近的牙槽骨上淡紅色的結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮及固有層組成。是口腔黏膜的一部分，血管豐富，呈淡紅色，堅韌而有彈性，因缺乏黏膜下層，直接與骨膜緊密相連，故牙齦不能移動。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介 公司實驗室分離的人牙齦成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測 公司實驗室分離的人牙齦成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
關(guān)鍵操作技巧與注意事項：
成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)節(jié)控制：
嚴(yán)格無菌操作：這是實驗成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，試劑和耗材必須無菌。
保持靜置：細(xì)胞接種后的最初24-48小時內(nèi)，應(yīng)保持培養(yǎng)瓶絕對靜置，避免頻繁取出觀察或晃動，這有助于細(xì)胞貼壁和伸展。
優(yōu)化消化過程：
消化時間要恰到好處，過長會損傷細(xì)胞，過短則細(xì)胞分散不佳。
膠原酶對組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細(xì)胞；胰蛋白酶作用較強(qiáng)，需嚴(yán)格控制時間。
酶液應(yīng)新鮮配制，避免活性下降。
控制接種密度：原代細(xì)胞在低密度下不易存活，建議適當(dāng)提高初始接種密度，以保證細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)其生長。
定期換液：根據(jù)培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補(bǔ)充營養(yǎng)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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細(xì)胞培養(yǎng)操作
消化培養(yǎng)法
此方法利用酶（如胰蛋白酶、膠原酶）將組織分散成單個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，形成細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞生長較快。
取材與剪切
同樣在無菌條件下獲取組織，并用Hanks液清洗干凈。
將組織剪切成更小的碎塊（約 1 mm3），以便酶更好地發(fā)揮作用。
酶消化
將組織塊轉(zhuǎn)移至容器中，加入適量的酶消化液（如0.25%胰蛋白酶）。
在 37℃ 條件下消化 20-40分鐘，期間可適當(dāng)搖動或吹打。消化程度需在顯微鏡下觀察，當(dāng)組織分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞時，立即終止消化。
終止與洗滌
加入含血清的培養(yǎng)液以終止酶的消化作用（血清可抑制胰蛋白酶活性）。
將細(xì)胞懸液通過篩網(wǎng)過濾，除去未消化的組織塊。然后以 1000 rpm 離心 5-10分鐘，棄去上清液。
接種與培養(yǎng)
用適量新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，并調(diào)整細(xì)胞密度至實驗所需濃度（例如 5×10? cells/mL）。
將細(xì)胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
關(guān)鍵字： 人牙齦成纖維細(xì)胞;牙齦組織;貼壁;
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