洋蔥伯克氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 洋蔥伯克氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Burkholderia cepacia Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4308 |
性能特點(diǎn)
即開即用：用戶僅需提供DNA模板，預(yù)混引物及反應(yīng)體系優(yōu)化完成。
高特異性：針對(duì)洋蔥伯克氏菌保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)引物，避免非特異性擴(kuò)增。
高靈敏度：SYBR Green染料法檢測(cè)，靈敏度顯著高于常規(guī)PCR。
閉管操作：減少氣溶膠污染風(fēng)險(xiǎn)。
兼容性廣：適配ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流熒光定量PCR儀。
試劑盒組成
2×qPCR Magic Mix：500 μL（預(yù)混含SYBR Green染料、dNTPs、聚合酶等）。
熒光PCR專用模板稀釋液：1 mL（黃蓋）。
qPCR引物混合液：100 μL（靶向洋蔥伯克氏菌特異性序列）。
陽(yáng)性質(zhì)控品：50 μL（含目標(biāo)基因片段）。
陰性質(zhì)控品：50 μL（無(wú)核酸酶水）。
說(shuō)明書：1份。
注意：不同批號(hào)組分不可混用，避免反復(fù)凍融（建議分裝保存）。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
保存條件：-20℃±5℃避光保存，有效期12個(gè)月，凍融次數(shù)≤7次。
運(yùn)輸條件：低溫冰袋（2~8℃）運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)步驟
樣本制備
采集樣本（如胃液分泌物、培養(yǎng)物等）需符合《臨床微生物樣本采集規(guī)范》。
短期保存于-20℃，長(zhǎng)期保存需-70℃以下（≤6個(gè)月）。
反應(yīng)體系配制
按20μL體系混合：10μL 2×預(yù)混液、2μL引物混合液、2μL模板DNA、6μL無(wú)核酸酶水。
PCR擴(kuò)增程序
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信號(hào)采集）；
熔解曲線分析（可選）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以陽(yáng)性對(duì)照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測(cè)：
陰性對(duì)照Ct≥40；陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30且有典型擴(kuò)增曲線；
樣本Ct≤35判為陽(yáng)性，Ct≥40為陰性；35<Ct<40需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
使用無(wú)核酸酶耗材（吸頭、離心管等）。
熔解曲線分析可輔助驗(yàn)證擴(kuò)增特異性。
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