伯克氏菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 伯克氏菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Burkholderia spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4309 |
檢驗(yàn)原理
采用SYBR Green染料法實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，針對伯克氏菌屬高度保守基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過熒光信號實(shí)時監(jiān)測核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定性及定量分析。
試劑盒組成
擴(kuò)增反應(yīng)液：含預(yù)混PCR緩沖液、dNTPs、SYBR Green染料（950μL/管）。
引物混合液：伯克氏菌屬特異性引物（100μL/管）。
陽性質(zhì)控品：伯克氏菌標(biāo)準(zhǔn)核酸（50μL/管）。
陰性質(zhì)控品：無核酸酶水（50μL/管）。
模板稀釋液：用于樣本核酸稀釋（1mL/管）。
說明書：1份。
注意：不同批號組分不可混用，試劑盒內(nèi)組分滿足50次檢測需求。
儲存條件及有效期
儲存：-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤7次）。
有效期：12個月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/StepOnePlus
Roche LightCycler系列
Bio-Rad CFX系列
MX3000P/3005P
Eppendorf Mastercycler ep realplex
自備耗材：無核酸酶離心管（0.2mL/1.5mL）、濾芯吸頭（10μL/200μL/1000μL）、離心機(jī)、移液器等。
樣本要求
樣本類型：胃液分泌物、培養(yǎng)物等（需避免交叉污染）。
保存條件：
短期：-20℃（≤1個月）；
長期：-70℃（≤6個月）。
運(yùn)輸：2~8℃冰袋運(yùn)輸，禁止反復(fù)凍融。
操作步驟
樣本處理：按規(guī)范提取核酸，建議使用商業(yè)提取試劑盒。
反應(yīng)體系配制：
取18μL反應(yīng)液 + 2μL模板DNA（或陰/陽對照）。
PCR程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)，熒光采集）。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)擴(kuò)增曲線和Ct值判定結(jié)果。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測低至幾百拷貝/反應(yīng)。
特異性：引物針對伯克氏菌屬保守序列，無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：批內(nèi)/批間變異系數(shù)≤5%。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
陽性質(zhì)控品需單獨(dú)存放，防止污染其他試劑。
失效或開封后未使用完畢的試劑需標(biāo)記并棄置。
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