產(chǎn)品概述

本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專(zhuān)用于犬利什曼原蟲(chóng)核酸的定性與定量檢測(cè)。適用于科研用途（不可用于臨床診斷），具有高靈敏性、高特異性及寬線性范圍（覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)）。

規(guī)格與成分

| 編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |

| 試劑一 | qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |

| 試劑二 | qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 試劑三 | 熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液 | 1 mL |

| 試劑四 | 犬利什曼原蟲(chóng)引物混合液 | 100 μL |

| 試劑五 | 犬利什曼原蟲(chóng)探針 | 50 μL |

| 試劑六 | 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL）| 50 μL |

| 其他 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |

反應(yīng)次數(shù)：50次（20 μL體系/次）。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。

運(yùn)輸方式：低溫泡沫箱加冰密封運(yùn)輸，陽(yáng)性對(duì)照需單獨(dú)放置以防污染。

自備試劑

樣品RNA提取試劑（兼容柱式病毒RNA提取試劑盒或自選純化方法）。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10倍梯度稀釋?zhuān)?/span>

標(biāo)記6管（7至2號(hào)），每管加45 μL稀釋液。

依次從7號(hào)管（1×10?拷貝/μL）稀釋至2號(hào)管（1×102拷貝/μL），冰上保存?zhèn)溆谩?/span>

2. 樣品RNA制備

建議設(shè)置N+2個(gè)樣本（含陽(yáng)性/陰性對(duì)照），使用1000倍稀釋陽(yáng)性對(duì)照作為制備對(duì)照（PC），水作為陰性對(duì)照（NC）。

3. qRT-PCR反應(yīng)（20 μL體系）

加樣表：

| 成分 | 樣品管（N+2） | 陰性對(duì)照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探針 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 樣品RNA/標(biāo)準(zhǔn)品/水 | 5 μL | 5 μL水 | 5 μL標(biāo)準(zhǔn)品 |

反應(yīng)程序：

逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘

預(yù)變性：94℃ 10分鐘

40循環(huán)：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集FAM信號(hào)）

數(shù)據(jù)分析

定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸計(jì)算樣品濃度。

定性檢測(cè)：

陰性對(duì)照Ct≥40，陽(yáng)性對(duì)照Ct≤36且有擴(kuò)增曲線。

樣品Ct≤36為陽(yáng)性；≥40為陰性；36-40需復(fù)測(cè)。

注意事項(xiàng)

分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、加樣），避免交叉污染。

使用帶芯槍頭，所有試劑使用前短暫離心混勻。

實(shí)驗(yàn)后工作臺(tái)需用10%次氯酸或75%酒精消毒。

公司正在出售的產(chǎn)品