檢驗原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術，針對利什曼原蟲屬（Leishmania spp.）基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物。通過熒光信號實時監(jiān)測核酸擴增過程，實現(xiàn)定性及定量檢測，靈敏度高，特異性強。
產(chǎn)品名稱 | 利什曼原蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Leishmania spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4410 |
試劑組成
| 組分名稱 | 規(guī)格 |
| 預混PCR反應液（含SYBR Green） | 1 mL × 1管 |
| 利什曼原蟲通用引物混合液 | 100 μL × 1管 |
| 陽性質(zhì)控品（1×10^8 copies/μL） | 50 μL × 1管 |
| 陰性質(zhì)控品（DEPC-H2O） | 50 μL × 1管 |
| 說明書 | 1份 |
注意：不同批號組分不可混用，試劑盒內(nèi)組分可滿足標稱檢測次數(shù)。
儲存條件及有效期
儲存：-20℃±5℃避光保存，避免反復凍融（建議分裝，凍融≤7次）。
運輸：低溫干冰或冰袋（2~8℃）。
有效期：12個月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler系列
Eppendorf Mastercycler ep realplex
自備耗材：無核酸酶離心管（0.2 mL PCR管、1.5 mL EP管）、濾芯吸頭（10/200/1000 μL）、離心機、移液器等。
樣本要求
樣本類型：組織、血液、培養(yǎng)物等，具體采集方法需參照《臨床微生物樣本采集規(guī)范》。
保存：短期-20℃保存，長期-70℃保存（避免反復凍融）；運輸需使用2~8℃冰袋。
使用方法
1. DNA提取
使用商業(yè)化核酸提取試劑盒或自選方法純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）
每反應體系20μL：
預混PCR反應液 10 μL
引物混合液 2 μL
模板DNA 2 μL
超純水 6 μL
3. 擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲線分析 | 60~95℃ | — | 1 |
4. 結果分析
定性：Ct值≤35且熔解曲線峰值單一判為陽性。
定量：通過標準曲線（10^2~10^7 copies/μL）計算拷貝數(shù)。
注意事項
實驗需分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴增區(qū)），避免交叉污染。
陽性質(zhì)控品需單獨存放，防止污染其他組分。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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關鍵字： 利什曼原蟲通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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