鐵皮石斛探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 鐵皮石斛探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Dendrobium officinale Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4684 |
產(chǎn)品基本信息
規(guī)格：50次/盒（20μL體系）
用途：科研專用，適用于鐵皮石斛的定性及定量檢測。
儲存條件：-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤7次），有效期12個月。
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用：僅需提供樣品DNA模板，預(yù)混優(yōu)化引物與探針。
高靈敏度與特異性：引物探針針對鐵皮石斛保守序列設(shè)計(jì)，避免與其他微生物交叉反應(yīng)。
雙重檢測功能：支持定性（陰陽性判定）和定量檢測（線性范圍≥5個數(shù)量級）。
內(nèi)置對照：含陽性對照（1×10?拷貝/μL），便于排除假陰性。
兼容性：適配多數(shù)市售核酸純化試劑盒。
試劑盒組成
熒光定量PCR預(yù)混液（含探針、dNTPs、酶等）
陽性對照DNA（1×10?拷貝/μL）
熒光PCR專用模板稀釋液
說明書（詳細(xì)組分以實(shí)際說明書為準(zhǔn)）
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量分析）
標(biāo)記6管（7-2號），每管加45 μL稀釋液。
梯度稀釋陽性對照：7號管加5 μL原液（終濃度1×10?拷貝/μL），依次稀釋至2號管（1×102拷貝/μL），冰上保存。
樣品DNA制備
自選方法提取DNA，建議設(shè)置N+2個樣本（含陰陽性對照）。
qPCR反應(yīng)設(shè)置（20μL體系）
定量分析：標(biāo)記N+9管（N+2樣本+1陰性對照+6標(biāo)準(zhǔn)曲線）。
程序設(shè)置：按儀器要求優(yōu)化（通常95℃預(yù)變性，40-45循環(huán)擴(kuò)增）。
數(shù)據(jù)分析
定量：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品濃度。
定性：陰性對照Ct≥40；陽性對照Ct≤30；樣品Ct≤35判為陽性，35<Ct<40需復(fù)測。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、加樣需獨(dú)立區(qū)域，避免污染。
防降解：試劑避光保存，使用前充分混勻并離心。
質(zhì)控要求：實(shí)驗(yàn)全程使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%酒精消毒臺面。
技術(shù)參數(shù)
檢測限：≤102拷貝/μL（依儀器性能可能調(diào)整）。
擴(kuò)增效率：≥90%（標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99）。
專利引物（參考CN108728573A）：
鐵皮石斛特異引物：TPF 5’-TATTGTGATAAGCGCGCCCG-3’，TPR 5’-AGGCCTATGCTATTGTGATAAGCG-3’。
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關(guān)鍵字： 鐵皮石斛;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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